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BspPI (AlwI)

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  • Thermo scientific -fermentas
  • ER1321
  • 2025年09月23日
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      大量

    • - 推荐的缓冲液 : Tango™
    • - 孵育温度55°C
    • - 连接效率70%
    • - Dam甲基化可能影响DNA切割
    • - 热失活80°C, 20 min
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Buffer Tango™
    ER1321 100 u (1-3 u/µl) 1.00 ml ER1321
    ER1322 500 u (1-3 u/µl) 1.00 ml ER1322
    Reaction conditions
    Recommended buffer for 100% activity Optimal temperature Enzyme activity in Fermentas buffers, % Tango™ buffer for double digestion
    B (blue)
    1X
    G (green)
    1X
    O (orange)
    1X
    R (red)
    1X
    Tango™ (yellow)
    1X / 2X
    Tango™ 55°C 20-50 20-50 0-20 0-20 100 0-20 1X

    Lambda DNA
    1.4%琼脂糖
    58 切割位点

    100%酶活性的反应条件
    1X 缓冲液Tango™:
    33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA。
    55°C酶切。

    保存缓冲液
    BspPI保存在:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

    连接和重新酶切
    10倍BspPI过量酶切后,大约70%的酶切产物可以连接(连接体系:20-40 u T4 DNA连接酶/1 μg酶切产物,10% PEG),超过50%连接产物能重新酶切。

    备注
    • 37°C酶切时只有30%的酶活性。
    • 底物为λ DNA (dam- ) (#SD0021)。
    • 重叠的Dam甲基化抑制BspPI酶切。为了避免Dam甲基化的影响,样本DNA需要从dam-, dcm- 菌株中抽提,如GM2163 (#M0099)。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    双酶切
    采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

    甲基化影响
    Dam: 完全重叠 – 阻止酶切。
    Dcm: 可能重叠 – 不影响。
    CpG: 可能重叠 – 不影响。
    EcoKI: 无重叠 – 不影响。
    EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。

    Methylation type Sequence Cleavage effect
    Dam (GATC)

    GGm6ATC

    阻止酶切
    Dcm (CCWGG)

    5'...Cm5CW GG ATC...3'
    3'...G GWm5CC TAG...5'

    不阻止酶切
    CpG

    5'...GGATm5C G ...3'
    3'...CCTA Gm5C ...5'

    不阻止酶切
    CpG

    5'...m5C G GATC...3'
    3'... Gm5C CTAG...5'

    不阻止酶切
    Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments
    bp from the recognition site to fragment end
    1 2 3 4 5
    0 50-100
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    58 0 4 12 10 10
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    10 10 10 10 13 4

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