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Thermo scientific BseMII (BspC

NI) FastDigest限制酶 thermo双酶切体系
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  • Thermo scientific -fermentas
  • ER1401
  • 2025年09月20日
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    • - FastDigest®限制酶
    • - 推荐的缓冲液 : Tango™
    • - 需要SAM
    • - 孵育温度55°C
    • - 连接效率90%
    • - 热失活80°C, 20 min
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Buffer Tango™ 50X SAM
    ER1401 100 u (1-3 u/µl) 1.00 ml 0.10 ml ER1401
    Reaction conditions
    Recommended buffer for 100% activity Optimal temperature Enzyme activity in Fermentas buffers, % Tango™ buffer for double digestion
    B (blue)
    1X
    G (green)
    1X
    O (orange)
    1X
    R (red)
    1X
    Tango™ (yellow)
    1X / 2X
    Tango™ 55°C 50-100 (+SAM) 50-100 (+SAM) 50-100 (+SAM) 50-100 (+SAM) 100 (+SAM) 50-100 (+SAM) 1X or 2X (+SAM)

    Lambda DNA
    1.0%琼脂糖
    80 切割位点

    100%酶活性的反应条件
    [1X 缓冲液Tango™] + SAM:
    [33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA] + 0.01 mM S-腺苷甲硫氨酸。
    55°C酶切。

    保存缓冲液
    BseMII保存在:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

    连接和重新酶切
    10倍BseMII过量酶切后,超过90%的酶切产物可连接,但是由于识别位点甲基化,连接产物不能重新酶切(见备注)。

    备注
    • 37°C酶切时只有30%的酶活性。
    • 酶活性需要SAM。酶切时可用Sinefungin替代SAM,此时DNA不会被甲基化修饰,超过95%的连接产物可以被该酶重新酶切。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    双酶切
    采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

    甲基化影响
    Dam: 无重叠 – 不影响。
    Dcm: 无重叠 – 不影响。
    CpG: 无重叠 – 不影响。
    EcoKI: 无重叠 – 不影响。
    EcoBI: 无重叠 – 不影响。

    Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments
    bp from the recognition site to fragment end
    1 2 3 4 5
    50-100
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    80 10 23 7 5 5
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    4 4 4 4 13 8

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