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- Thermo scientific -fermentas
- ER1011
- 2025年11月07日
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大量
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer G | 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER1011 | 200 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER1011 | |
| ER1012 | 1000 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER1012 | |
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| G | 37°C | 20-50 | 100 | 50-100 | 50-100 | 50-100 | 50-100 | 1X or 2X |
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
24 切割位点
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 50 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
备注
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| CpG | 5'...GAAGAm5C G ...3' |
不阻止酶切 |
| CpG | 5'...m5C G AAGAC...3' |
不阻止酶切 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 50-100 | ||||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 24 | 3 | 0 | 3 | 0 | 0 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | 3 |
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文献和实验CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- sgRNA 及引物设计
来看一下。提交订单，等待引物到达：华大基因的速度非常快，大约在 2 - 3 个工作日即可拿到，在等待期间需要准备好：LB + 抗生素抗性平板；感受态细胞及相应培养基；无内毒素的 Cas9 载体质粒；BbsI 限制性内切酶；质粒小提试剂盒；常规限制性内切酶。
手把手教你利用 CRISPR-Cas9 系统精准敲除靶标基因
puromycin 抗性筛选标记。图 3 PX458M 图谱图 4 PX459M 图谱图 5 EZ-GuideXH 图谱PX458M 和 PX459M 载体是从张峰实验室 PX458 and PX459 载体改造过来的。主要是引入了第二个向导性 RNA 插入的多克隆位点。EZ-GuideXH 来源于 EZ-T 克隆载体。四、Guide RNA 的插入根据张峰实验的实验操作方法， guide RNA 插入方法很简单。如图 6 所示，可以用 BbsI 消化 PX458 载体, Guide RNA 是通过引物退火方法
CRISPR/Cas9 是一种强大的基因组编辑工具，今天我们介绍 CRISPR/Cas9 系统操作。以下操作说明是基于作者冰糖个人实验室操作，仅供参考。 质粒介绍我们使用的是 Feng Zhang 实验室的系统的 pX330 质粒，如下图所示： 酶切系统 37 ℃, 3 hr；Run 1% gel，回收。Elute 到 50 mL H2O。我们利用 BbsI 消化载体形成粘末端，以利于下游 oligo 退火产物的连接；酶切时请充分，且绝对不能加 CIP 处理
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