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- Thermo scientific -fermentas
- K0301
- 2025年10月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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| Catalog# | Size, concentration | Certificate of Analysis | MSDS |
| K0301 | 250 ml (for 125 extractions from 100 µl of wet cell pellet or 500 extractions from 100 mg of tissue) |
K0301 |
- Features
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- 从哺乳动物培养细胞和组织样本中抽提总蛋白的产量高。
- 即用型包装。
- 便利 一 室温反应。
- 使用方便–无需超声破碎和冻-融循环等处理。
- 与下游应用兼容：
一 蛋白定量，
一 1D和2D电泳，
一 免疫沉淀和Western杂交，
一 EMSA，酶活性和报告基因分析。
- Applications
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- 从哺乳动物组织和培养细胞(粘附细胞和悬浮细胞)抽提天然的未变性蛋白。
该方法抽提的蛋白仍然保持其天然、非变性功能状态。因此抽提的蛋白能直接用于多种蛋白质组学和酶活性应用，包括免疫沉淀、亲和纯化、报告基因分析和电泳迁移滞后分析(EMSA)。分离的蛋白与Bradford和Lowry等定量方法兼容。
从多种细胞系(A )和小鼠组织(B )中抽提总蛋白。抽提物12% SDS-PAGE电泳分离后凝胶染色。染色溶液为PageBlue™ Protein Staining Solution (#R0571)。
A
1 – HEP2C细胞
2 – 人原代成纤维细胞
3 – NIH3T3细胞
4 – HEK293细胞
5 – Cos7细胞
6 – HeLa细胞
7 – B50细胞
8 – CHO细胞
9 – Raji细胞
10 – Jurkat细胞
B
11 – 肝
12 – 肾
13 – 脾
14 – 肺
15 – 肌肉
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文献和实验ULTIMATE FREEZE-THAW LYSIS FOR MAMMALIAN CELLS
-abundance proteins (like Myc!).The protocol is described for harvesting mammalian cells from 6 or 10 cm tissue-culture dishes.A.CELL HARVEST.1.Remove media from cells.Wash in ice-cold PBS.2.Scrape cells in 1 ml of ice-cold PBS.Transfer to 1.5 ml microfuge
,and the cell pellets were frozen and stored at –80ºC. Lysis Lysis was accomplished with B-PER reagent supplemented with 1/50 vol 10-mg/ml chicken egg-white lysozyme (stored at –80ºC in aliquots),1/125 vol 5-mg/ml DNaseI (in 20 mM sodium acetate,pH adjusted
Chromatin Immunoprecipitation from Mammalian Cell Extracts
1.Crosslink protein DNA complexes in vivo Grow cells in suspension and collect 5 x108 cells by low speed centrifugation.Resuspend cells in 50ml media.In fume hood,add 1.4ml 37% fomaldehyde solution to a 50ml conical tube.Fill tube with cell culture
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