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- Thermo scientific -fermentas
- K0311
- 2025年10月14日
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- 技术资料
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| Catalog# | Size, concentration | Certificate of Analysis | MSDS |
| K0311 | for 50 preps | K0311 |
- Features
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- 通用 一 从细胞或组织样本中分离完整的细胞核和细胞质蛋白。
- 高质量分离 一 细胞质和细胞核组分不会交叉污染。
- 快速 一 整个流程少于1小时。
- 与下游应用兼容：
一 蛋白定量，
一 1D和2D电泳，
一 免疫沉淀和Western杂交，
一 EMSA，酶活性和报告基因分析。
- Applications
-
- 从哺乳动物组织和培养细胞中分离天然的未变性细胞质和细胞核蛋白。
说明
ProteoJET™ Cytoplasmic and Nuclear Protein Extraction Kit设计用于快速逐步分离培养细胞和组织样本中的天然未变性细胞质蛋白和完整的细胞核蛋白。该流程使用温和变性剂，操作简单、快捷。抽提的蛋白可直接用于多种蛋白质组学和酶活性应用，包括免疫沉淀、亲和纯化、报告基因分析等。采用该试剂盒制备的细胞抽提物与下游应用兼容，包括1D和2D电泳、Western杂交和电泳迁移滞后分析(EMSA)。分离的蛋白与Bradford和Lowry等定量方法兼容。
分离的细胞核可置于配套提供的Nuclei Storage Buffer中冻存，也可用Nuclei Lysis Reagent裂解。完整的细胞核还可用于分离染色质、组蛋白和核内RNA。核抽提物可用于2D分离、DNA-蛋白的相互作用(EMSA)分析和其它应用。
试剂盒组分足够完成50个样本(50 μl湿细胞沉淀或100 mg组织/次)的细胞质和细胞核组分抽提。
质量控制
功能测试：从哺乳动物悬浮细胞培养物中抽提细胞质和细胞核蛋白。
组分
- Cell Lysis Buffer
- Nuclei Washing Buffer
- Nuclei Storage Buffer
- Nuclei Lysis Reagent
- 1 M DTT
- 详细的操作手册
保存
除1 M DTT外，其它的组分4°C可以保存至少1年。
图1。ProteoJET™ Cytoplasmic and Nuclear Protein Extraction Kit从各种细胞系中分离细胞质和细胞核蛋白。
10 μg细胞质蛋白和5 μl纯化的细胞核蛋白经12% SDS-PAGE电泳分离。凝胶经PageBlue™ Protein Staining Solution (#R0571)染色。
1 – Jurkat细胞的细胞质蛋白
2 – Jurkat细胞的细胞核蛋白
3 – HeLa细胞的细胞质蛋白
4 – HeLa细胞的细胞核蛋白
10 μg细胞质蛋白和5 μl纯化的细胞核蛋白经12% SDS-PAGE电泳分离。凝胶经PageBlue™ Protein Staining Solution (#R0571)染色。
1 – Jurkat细胞的细胞质蛋白
2 – Jurkat细胞的细胞核蛋白
3 – HeLa细胞的细胞质蛋白
4 – HeLa细胞的细胞核蛋白
图2。不同细胞系分离的细胞质和细胞核蛋白的EMSA分析。
* [alpha-33 P] 标记的DNA含有AP-1转录因子结合序列。
1 – 未加蛋白
2 – Cos7细胞的细胞质蛋白
3 – Cos7细胞的细胞核蛋白
4 – NIH3T3细胞的细胞质蛋白
5 – NIH3T3细胞的细胞核蛋白
6 – HeLa细胞的细胞质蛋白
7 – HeLa细胞的细胞核蛋白
* [alpha-33 P] 标记的DNA含有AP-1转录因子结合序列。
1 – 未加蛋白
2 – Cos7细胞的细胞质蛋白
3 – Cos7细胞的细胞核蛋白
4 – NIH3T3细胞的细胞质蛋白
5 – NIH3T3细胞的细胞核蛋白
6 – HeLa细胞的细胞质蛋白
7 – HeLa细胞的细胞核蛋白
图3。Western杂交分析展示纯化的细胞质和细胞核蛋白。
5 μg细胞质蛋白和10 μl纯化的细胞核蛋白经12% SDS-PAGE电泳分离。细胞质蛋白(微管蛋白)和细胞核蛋白(组蛋白H4)经特异性抗体检测。
1 – Jurkat细胞的细胞质蛋白
2 – Jurkat细胞的细胞核蛋白
3 – HeLa细胞的细胞质蛋白
4 – HeLa细胞的细胞核蛋白
5 μg细胞质蛋白和10 μl纯化的细胞核蛋白经12% SDS-PAGE电泳分离。细胞质蛋白(微管蛋白)和细胞核蛋白(组蛋白H4)经特异性抗体检测。
1 – Jurkat细胞的细胞质蛋白
2 – Jurkat细胞的细胞核蛋白
3 – HeLa细胞的细胞质蛋白
4 – HeLa细胞的细胞核蛋白
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