Thermo Scientific Pierce交联IP试剂

Thermo Scientific Pierce 交联 IP 试剂盒采用传统 IP 方法，以包括将 IP 抗体交联至蛋白 A/G 琼脂糖的试剂和方案，从而在不产生抗体污染的情况下实现抗原免疫沉淀。

这些特点带来的主要益处是能够纯化靶蛋白而不被抗体污染，并且能够更有效地洗涤样品并从微珠状琼脂糖树脂中分离样品。

交联 IP 试剂盒的特点：

•消除抗体污染—将抗体不可逆地连接至琼脂糖微珠，从而尽可能减少重链和轻链与纯化蛋白共洗脱
•简单高效的可扩展性—仅使用单一 IP 实验所需的抗体量或固定 100-200 μg 抗体即可制备现成 IP 亲和树脂用于许多实验
•测定可靠性和样品的处理—Pierce 离心柱可消除树脂损耗，且溶液分离效率高于仅使用微量离心管的传统 IP 方法
•制备的抗体亲和树脂可重复使用—抗体以共价方式固定化，且通常不会被温和洗脱程序灭活，因此树脂通常可重复使用数次
•全套试剂盒—包装中包括足以进行至少 50 次抗体固定和 IP 实验的试剂和离心柱

应用：
•随后通过电泳和蛋白切除进行质谱或测序鉴定分析的免疫沉淀
•对分子量与重链或轻链抗体片段相似的靶蛋白进行的免疫沉淀和 SDS-PAGE 分析
•对通过非变性方法（即，不涉及 SDS-PAGE 的方法）进行后续分析的靶蛋白进行的免疫沉淀

Pierce 交联 IP 试剂盒方法涉及将 IP 抗体捕获至蛋白 A/G 琼脂糖树脂并通过与辛二酸二琥珀酰亚胺酯 (DSS) 交联将其共价固定至支持物上。然后将抗体树脂与含有目标蛋白抗原的样品一起孵育，使抗体:抗原复合物可形成。进行洗涤以去除样品中的非结合（可能不需要）组分后，通过使用试剂盒中提供的洗脱缓冲液从抗体中解离来回收抗原。在微量离心杯中完成整个程序，使得短暂离心后溶液与琼脂糖树脂完全分离。只有通过该程序对抗原进行洗脱，才能在不受抗体片段干扰的情况下识别和进一步分析抗原。此外，抗体树脂通常可以重复使用，用于其他轮次的免疫沉淀。