- 询价
- 上海
- microRNA-circRNA(lncRNA) 靶基因验证实验
- 暂无货号
- 2025年12月30日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称：
microRNA-circRNA(lncRNA) 靶基因验证实验
- 提供商：
上海英拜生物科技有限公司
环状RNA(circRNA)和长链非编码RNA(lncRNA)是一类非编码RNA,不翻译蛋白。但在细胞中它们能够调控其他基因的表达变化。近年的研究表明circRNA和lncRNA分子富含microRNA结合位点，在细胞中起到miRNA海绵（miRNA sponge）的作用，进而解除miRNA对其靶基因的抑制作用，升高靶基因的表达水平，这一作用机制被称为竞争性内源RNA（ceRNA）机制。因此，通过与疾病关联的miRNA相互作用，circRNA和lncRNA在疾病中发挥着重要的调控作用。研究cirRNA、lncRNA的调控机制需要先找到与cirRNA、lncRNA相互作用的miRNA，而荧光素酶报告基因实验可以用来证明miRNA与circRNA, miRNA与lncRNA的直接相互作用。
英拜生物microRNA报告基因实验流程：
1. microRNA靶点的预测
利用Targetscan,miRanda,PicTar软件得到目的microRNA的预测靶点序列。
2. 获得microRNA靶点序列
根据提供的靶序列，合成两条互补的单链DNA模板。或者，设计引物PCR扩增microRNA靶基因序列(lncRNA,circRNA全长序列或靶标序列)。
3. cirRNA靶序列克隆
将合成的两条单链退火成双链（具有粘性末端），或将PCR产物双酶切，后连入经过同样双酶切的Psicheck-2载体中，连接产物转化大肠杆菌DH5α。
4. 阳性克隆鉴定。
挑选转化的菌落，PCR筛选含有插入片段的阳性克隆，测序验证克隆的序列和目的microRNA靶序列一致。
5. 细胞转染准备
将psicheck-2报告基因载体、microRNA mimics或microRNA negative control共转染293T或Hela细胞。
6. 荧光素酶检测
报告基因载体与microRNA mimics或microRNA negative control共转染293T或Hela细胞24-72h后，进行双荧光素酶检测，确定目的microRNA的靶基因。
7. 整理分析数据，得出结论。
提供有microRNA靶序列的报告基因质粒、甘油保存菌株各一支。附实验报告，包括载体构建过程，鉴定记录，测序报告，细胞转染，荧光检测。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验rRNA比例评估 Ø 基本比对统计，链特异数据评估 Ø Cufflink,stringtie转录本组装 2. 特性分析 Ø 序列，位点保守性分析 Ø 外显子个数,表达和长度分析 Ø 定量差异分析 3. 新LncRNA鉴定 Ø 与已知lncRNA库比对过滤 Ø 过滤exon Ø CPC,CNCI,phyloCSF编码潜能预测 Ø ORF长度过滤 Ø miRNA前体序列过滤 4. 功能分析 Ø 顺和反式靶基因预测 Ø 靶基因功能富集分析 Ø
：同上述的lncRNA方法步骤。 circRNA敲除：同上述的lncRNA方法步骤。 circRNA靶基因寻找：同上述的miRNA和lncRNA双荧光素酶检测方法。 和元生物的优势： 项目经验丰富，成功率高； 价格优惠，享受折扣； 实验周期短； 完善的售后服务。 和元生物提供的服务： 服务内容 服务形式一 服务形式二 整体课题外包服务 miRNA过表达 质粒构建 慢病毒/腺相关病毒/腺病毒
近两年microRNA的研究受到越来越多科学家的关注，大量的实验结果揭示了microRNA在胚胎发育、癌症等方面起到非常重要的调控作用，据推测microRNA可能调控至少30%的基因的表达情况。 如果您也想开展microRNA的研究，该如何下手了？首先你需要知道在你感兴趣的研究领域里到底有哪些miRNA是活跃分子，幸运的话通过阅读发表的文章就能锁定一些miRNA分子，否则需要做一个miRNA表达谱芯片分析来初筛出有研究价值的那些miRNA。表达谱芯片的原理简单的说就是把待测样品中的miRNA
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
