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- 天根生化科技（北京）
- 中国
- VT205-01
- 2025年12月06日
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天根生化科技（北京）
- 规格：
20次
产品简介
pLB零背景快速克隆试剂盒是一种阳性选择克隆系统，可以高效克隆各种PCR产物和任何具有平末端或粘性末端的DNA片段。该试剂盒对磷酸化或非磷酸化的DNA片段都有效。阳性选择载体和插入片段连接仅需5 min即可获得超过95%的阳性重组克隆。由具有校正活性的聚合酶（如：Pfu Polymerase）扩增的平末端PCR产物可直接连入克隆载体。由无校正活性的聚合酶（如：Taq Polymerase）或聚合酶混合物扩增的PCR产物在连接前需用试剂盒提供的热稳定DNA平端化酶进行末端平端化（7 min）即可。连接产物可直接转化常用的大肠杆菌菌株。
试剂盒提供一个新颖的即用型阳性选择克隆载体pLB Vector。该载体含有致死基因（内含多克隆位点），多克隆位点插入外源片段会引起基因失活，因此只有转化了重组质粒的细菌才能存活形成克隆菌落。而自身环化的pLB Vector表达致死的毒性蛋白（无外源片段插入），转化后杀死大肠杆菌细胞。这种阳性筛选策略无需蓝白斑筛选，极大地加速了克隆筛选进程。
产品特点
高效快速：零背景无需蓝白斑筛选，5 min快速连接
灵敏广泛：适合低浓度片段和长片段连接，适合平/粘末端连接
不同片段使用量
1.载体与片段的摩尔比控制在1:3-1:10，对于1kb以下的片段建议使用1:3的比例，1kb以上的片段建议使用1:7的比例。
2.请根据凝胶电泳或紫外分光光度计检测后的浓度和片段长度来计算其摩尔比。插入片段用量，可根据以下公式粗略计算：
连接体系中35ng的载体，不同大小的PCR产物最佳加入量举例如下：
| PCR产物长度（bp） |
最佳的使用量（ng） |
| 700 bp |
25 ng |
| 2000 bp |
165 ng |
pLB Vector图谱
反应体系
标准体系为10 μl体积，5 μl的反应体系也能取得很好的效果，试剂用量减半。
保存条件
请将试剂盒置于-20℃保存，避免反复冻融。
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文献和实验在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ，通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因（比如CAT，β-Gal，GUS）不够便利。因为各自的测试化学，处理要求，检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术，结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因测试系统，结合pRL载体系统，表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶，在单管中进行双荧光素酶报告基因测试，快速，灵敏，简便。系统还提供PLB裂解液，用来裂解在多孔板中培养的哺乳细胞，不需操作单个样品
后都只是平端产物。这种平端克隆往往效率低，并且有非特异性背景菌落产生，造成筛选困难。Topo平端克隆主要改良载体设计，把ccdB （Control of cell death）基因并入到mcs中，如果没有DNA片断插入，ccdB基因则会表达，ccdB基因的表达蛋白，会破坏细菌的DNA gyrase，造成细菌染色体的降解导致细菌死亡。如果有插入片断，则ccdB基因表达受到阻碍，所以细胞可生长。这样可以把高背景的缺点改善，节省筛选的时间。Topo平端克隆与Topo TA方法一样，操作简单快速。Zero
荧光成像需要维持一个微妙的平衡。一方面需要采集足够强的信号，这可以通过延长曝光时间或增强激发光实现。另一方面，需要通过缩短激发时间和降低激发光强度来最大限度降低样品条件下的光毒性。探索如何利用显微镜相机实现这一平衡的最佳方法。 使用直方图 直方图可以帮助确定理想的曝光时间。 直方图就是反映信号强度分布的图。直方图的X轴代表信号强度。数据分布范围为零到相机最大信号强度。每个 X 值对应的直方图高度代表了该信号强度下的像素数量，如下图 1 所示。 图 1：图像的直方图。（a）原始图像，（b
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