- ¥650
- 天根生化科技（北京）
- 中国
- VT402
- 2026年01月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
充足
- 供应商：
天根生化科技（北京）
- 规格：
20 ul
产品简介：
pGM-T 连接试剂盒适用于PCR产物的克隆,可将PCR产物连接到pGM-T载体上，便于进行下一步实验。DNA 片段连接是经常出问题的步骤,为了提高连接效率，本试剂盒提供了两种连接Buffer供不同情况选择： 10 × Ligation BufferⅠ适合置于 16℃连接过夜，可获得最佳连接效果；2×Ligation Buffer Ⅱ为快速连接Buffer，25℃连接10 分钟即可转化，快捷方便。
自备试剂：
克隆实验需自备IPTG、X-Gal和二甲基甲酰胺
保存条件：
感受态细胞要严格的在-70℃冰存，SOC培养基置于2-8℃保存。其余的试剂于-20℃保存，避免反复冻融。
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文献和实验5. 不受粘末端或平末端的限制6. 超简洁反应体系配制：只需将克隆片段与线性化的载体按一定比例加入Lightening Assembly Master Mix即可7. 超快速：克隆连接反应只需10-15分钟较传统克隆方法，操作步骤更少，所需试剂更少，所需时间大大缩短。8. PCR产物可直接与表达载体连接，无需酶切或连入克隆载体。应用范围：1. 平末端和粘末端DNA片段克隆。 2. 1到多个DNA片段克隆。3. 点突变。 4. 长片段克隆。5. DNA片段上有和载体相同的酶切
/GATCY) 这几个酶切产物粘端突出部分都一样是 5’GATC，能互补，可以相互连接。此外，所有平末端酶切产物都可以相互拼接，只是连接效率低些。要是运气再背点、酶切粘端怎么都不配对？用 Klenow 大片段或者T4聚合酶或“削平”或“补齐”得到平末端，再“强行连接”。。。这种目标片段前后都是平端的、或者单酶切的，载体“自恋”（自我连接）还可以用大小区分，目标片段可能正向接入或者倒装，如何在筛选时进行区分，又多了一个麻烦事儿。要是用到甲基化敏感的内切酶，比如 HPhI（对 Dam、Dcm 甲基化敏感
上，adaptor由一长链（40 nt）和一短链（10 nt）组成的一端是平端的双链DNA片段，长链3′端与cDNA 5′端相连。长链外侧序列（约20 nt）与第一次PCR引物序列相同，而内侧序列则与第二次引物序列同。此外，接头上含有Ｔ7启动子序列及内切酶识别位点，为以后连接克隆载体和测序提供方便； ③用过量的Driver样品分别与两份Tester样品进行第一次扣除杂交，分别得到4种产物。这种不充分杂交使得单链cDNA分子在浓度上基本相同。同时由于Tester cDNA中与Driver cDNA序列相同片段
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