MTS比色法细胞繁殖定量检测试剂盒

MTS比色法细胞繁殖定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

MTS比色法细胞繁殖定量检测试剂是一种旨在通过四氮唑MTS和电子偶联化合物在代谢旺盛细胞中的脱氢酶的作用下，产生水溶性棕色甲簪产物，作为检测信号来比色定量测定活体细胞繁殖的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。替代传统的操作繁琐和有害物质同位素[³H]-thymidine或[⁵¹Cr]释放检测的最佳选择。适用于各种生长中的动物、人体、酵母等细胞。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，着色清晰，具有高通量功能。

技术背景

在细胞生物学中，细胞繁殖检测常常用于研究生长因子、细胞因子、营养因子、化学物、以及淋巴细胞的激活和毒力作用。作为细胞染色剂之一的四氮唑MTS和电子偶联化合物染料可以自由地进入活细胞中。细胞繁殖快，其代谢旺盛，脱氢酶的活性增强，从而还原细胞浆中的染料为无毒性、水溶性、棕色产物而留存在细胞内，在490nm波长下产生吸收峰：吸收值与细胞量成线性正相关。细胞可以继续进行培养。这是继MTT和XTT染料检测后的更新换代的产品。

产品内容

清理液（Reagent A） 毫升
染色液（Reagent B） 毫升
结合液（Reagent C） 微升
稀释液（Reagent D） 毫升
产品说明书 1份

保存方式

保存染色液（Reagent B）和结合液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照和反复冻融；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于直接法染色工作液配制的容器
15毫升锥形离心管：用于间接法染色工作液配制的容器
培养箱：用于反应孵育
酶标仪：用于比色测定
完全细胞培养基（GMS12052）：用于细胞的继续培养




实验步骤

• 间接法

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）和结合液（Reagent C）在室温下融化，稀释液（Reagent D）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出4.5毫升稀释液（Reagent D）到新的15毫升锥形离心管，加入500微升染色液（Reagent B）和25微升结合液（Reagent C），混匀后，在室温下静置，并标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。

1. 从细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板
2. 小心抽去每孔中的培养液
3. 小心加入xx微升清理液（Reagent A）到96孔板中每一个孔里
4. 小心抽去每孔中的清理液（Reagent A）（注意：确保培养孔中无任何液体残留）
5. 小心加入xx微升染色工作液到96孔板中每一个孔里
6. 放进37℃培养箱里，孵育30分钟，或直至呈现棕色（注意：孵育后，可见溶液的颜色由黄色变成棕色）
7. 即刻放进酶标仪测读：波长490nm
8. 加入150微升用户自备的完全细胞培养液到96孔板中每一个孔里
9. 放回37℃，5%CO2细胞培养箱里继续培养

• 直接法

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）和结合液（Reagent C）在室温下融化。然后移出xx毫升染色液（Reagent B）和xx微升结合液（Reagent C）到新的1.5毫升离心管，混匀后，在室温下静置，并标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。

1. 1. 从细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板
   2. 确保96孔板中每一个孔含有100微升细胞培养液
   3. 小心加入xx微升染色工作液到96孔板中每一个孔里
   4. 放进37℃培养箱里，孵育1小时（注意：对于不敏感细胞或生长缓慢细胞，可以延长孵育时间至4小时）
   5. 即刻放进酶标仪测读：波长490nm
   6. 放回37℃，5%CO2细胞培养箱里继续培养

注意事项

1. 本产品为200次（直接法）和400次（间接法）操作
2. 操作时须戴手套
3. 工作液配制，需根据具体需求调整试剂使用量
4. 使用新鲜配制的染色工作液，务必不要超过2小时，且注意避光
5. 整个操作须无菌操作
6. 建议96孔板里的细胞量在10000至500000范围为理想状态
7. 孵育时，须避光
8. 试剂使用后，即刻放回冰箱保存
9. 不同细胞对于染料的敏感性不同，因此必要时，可以延长孵育时间
10. 对于敏感细胞，不要过度孵育，否则降低检测的敏感性
11. 背景吸收值为0.1－0.2为理想状态
12. 悬浮细胞（例如血白细胞等）可采用直接法
13. 本公司提供系列细胞繁殖和毒性检测试剂盒

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海羽哚生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。