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- ZOMANBIO
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- 2025年12月10日
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2-8℃分别保存
- 保质期：
A液和B液2-8℃分别保存, 保质期一年
- 英文名：
ECL kit
- 库存：
大量现货
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 规格：
50ml
ECL化学发光检测试剂
产品简介:ECL化学发光检测试剂是基于Luminol的新一代化学发光底物试剂，它由辣根
过氧化物酶（HRP）催化发生化学反应，发出荧光，结果可以通过X光片压片和其
他显影技术展现或使用Luminometer检测。溶液A主要成分为Luminol及特制发
光增强剂 。溶液B主要成分为H2O2及特殊稳定剂。
适用范围:
ELISA
Western & Far-Western Blot
Dot Blot
Southern Blot
Northern Blot
操作步骤:
客户自备溶液
漂洗缓冲液：PBS中含0.05-0.1%的Tween-20。
封闭液（BSA型）
用封闭液或PBS稀释一抗，每个抗体的最佳稀释度根据实验来决定。
用封闭液或PBS稀释HRP标记的二抗，每个二抗的最佳稀释度根据实验来决定。
暗室、暗盒、X光片等曝光设备。
1. 封闭：将膜与封闭液室温振荡孵育60分钟，或4℃过夜。
2. 将膜与用封闭液稀释的一抗室温振荡孵育1~2小时或4℃过夜。
3. 用漂洗缓冲液洗膜2~3次，每次5分钟。
注意：增加漂洗次数、加大漂洗缓冲液量将有助于降低背景。
4. 将膜与用封闭液稀释的HRP标记的二抗室温振荡孵育1小时。
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本产品仅供科研使用.请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
北京庄盟国际生物基因科技有限公司
Beijing Zoman Biotechnology Co.,Ltd.
Order: 010-62617225
Technical: 010-62979301
Email: zomanbio@126.com
5. 用漂洗缓冲液洗膜2~3次，每次5分钟以除去未结合的HRP标记的二抗。
注意：膜和二抗孵育后必须充分洗涤，以除去膜上未结合的HRP标记的二抗。
6. 将底物试剂A和试剂B等体积混合制备底物工作液，底物工作液应现用现配。
注意：底物试剂从4度拿出后应平衡至室温，经实验证明反应温度是10~50℃，最佳反
应温度是20～37℃。每cm2膜约需0.125ml的底物工作液，为了取得最佳效果，建议使用新
鲜配制的底物工作液。
7. 洗涤好的膜摆放到保鲜膜上，将底物工作液滴加到膜上，确保工作液均匀覆盖在膜上，放置
1-2分钟。
8. 沥去或吸去多余的工作液，覆盖透明塑料膜保湿，随后X光片检测。
9. 暗室中小心地将X光片压到膜上，先初始曝光30秒，观察结果。改变曝光时间以取得最佳效
果。或做一曝光时间梯度。
注意：发光反应的前2－30分钟光信号最强，一般能持续数小时，但随着时间延长，光
信号降低。若抗原含量低、信号弱，可以适当延长曝光时间
其他规格另询价！
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文献和实验Ecl 显色原理：鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中，含有H2O2和鲁米诺，在HRP（辣根过氧化物酶）的作用下，发出荧光来。 试验步骤： 1）将两种显色底物1：1等体积混合（一般各1ml/membrane）。 2）将混合物覆盖在膜表面，1-2分钟，摇晃使均匀。 3）用保鲜膜把膜包起来，放入夹板中。 4）在暗室中将X光片，覆盖在膜的上面，夹好夹子，曝光1min。 5）显影、定影。 6）根据结果调整曝光时间和曝光区域，得到
蛋白质免疫印迹（Western Blot ）-底物化学发光 ECL 法
蛋白质免疫印迹（Western Blot ）可以：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA 相互作用后续分析。实验方法原理———底物化学发光 ECL 法Western 免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与 Southern 或 Northern 杂交
一般使用辣根过氧化物酶 HRP-ECL 发光法或碱性磷酸酶 AP-NBT/BICP 显色法。 1．HRP-ECL 发光法： 将 A、B 发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于 A、B 混合液滴上，熄灯至可见淡绿色荧光条带（5 min 左右）后滤纸贴角吸干，置于保鲜膜内固定于片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒，根据所见荧光强度曝光。取出胶片立即完全浸入显影液中 1～2 min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净晾干，标定
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