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- 经科
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- 国产
- 2026年10月21日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量现货
- 英文名：
RIPA Lysis Buffer
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
100ml
产品简介
RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一种传统的细胞及组织快速裂解液。RIPA裂解液有很多配方，按其裂解效果主要分为强，中，弱三种。RIPA弱裂解液裂解组织、细胞得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western等对蛋白活性没有严格要求的实验。本产品主要成分为：50 mM Tris-HCl (pH 7.4)，150 mM NaCl，1 mM EDTA-2Na2，0.25% Sodium deoxycholate，和1% NP-40。本产品适用于动物或植物组织及细胞样品，也可用于真菌或细菌样品。
使用方法
1、使裂解液充分融解，混匀，取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM，根据具体实验需求可选择加入蛋白酶抑制剂。
2、根据样品的类型进行如下操作：
对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（若血清中的蛋白没有干扰，可不洗）。按照 6 孔板每孔加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。用移液器吹打数下，使裂解液
和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，去除培养基，用手指把细胞用力弹散，按照 6 孔板每孔细胞加入150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应无明显的细胞沉淀。
如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解
液的用量。）使用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
3、样品充分裂解后，4℃ 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Westernblot、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常 6 孔板每孔细胞加 150ul 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200 或 250ul。
注意：RIPA 裂解液（弱）的裂解产物中经常会出现透明胶状物，其主要成分为基因组 DNA，当检测的目标蛋白不与基因组 DNA 紧密结合，可以直接离心裂解产物，取上清液用于后续实验；如果目的蛋白与基因组 DNA 结合非常紧密，可通过超声处理打碎打散透明胶纸物，随后离心取上清用于后续实验。
储存与运输
-20℃保存，一年有效。加入蛋白酶抑制剂后建议适量分装 -20℃冻存，避免反复冻融。
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文献和实验RIPA裂解液有很多配方，按其裂解效果主要分为强，中，弱三种。RIPA弱裂解液裂解组织、细胞得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western等对蛋白活性没有严格要求的实验。
1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor(sigma cat no P8340) and 10μl phosphatase inhibitorRIPA buffer 最终浓度1M Tris-HCl pH7.5) 5 ml 50mMNaCl 0.87g 0.15 MNa-deoxycholale 0.1g （1%）0.5M EDTA(pH8.0) 0.8mlNaF 41 mgNonidet P40 1 ml （1%）Aprotinin
细胞沉淀后，加入预冷的 RIPA 液（含PMSF），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。轻轻混匀细胞悬液，用振荡器在 4℃ 振荡 15min 以裂解细胞。 用经蒸馏水预冷的橡皮或塑料细胞刮棒将贴壁细胞转移至一离心管中。 于 4℃，10000 rpm 离心裂解液 15 min，迅速转移上清至另一离心管中，弃掉沉淀。 将 Agarose protein A+G 珠子混匀：用预冷的 PBS 洗涤 Agarose protein A+G 珠子两次，并将其用 PBS 调
「救命！做 WB 蛋白样品提取时，样品加入裂解液，离心后发现管里有很多的胶状物，非常粘稠，有点像鼻涕！多加裂解液稀释一下仍然没有效果，蛋白浓度还变得很低。不死心的我把它戳出来玩了一会，戳戳戳仍然是一大团，这粘稠物是什么？对我的后续实验会有什么影响？」 当你看到这团粘稠的「鼻涕」，就意味着你即将经历下面五个难题的考验： 1. 样品吸液困难 堵塞移液器：离心后吸上清液的时候胶状物会堵塞移液器头，移液后上清液所剩无几。 无法分离上清液：样品太
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