- ￥185 - 12755
- 翌圣生物（Yeasen）
- 上海
- 11201ES
- 2025年10月15日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃避光储存
- 保质期：
有效期18个月
- 英文名：
Hieff qPCR SYBR Green Master Mix
- 库存：
大量
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 规格：
1 mL(11201ES03)/5×1 ml(11201ES08)/100×1mL(11201ES60)/50×1mL(11201ES50)
| 规格： | 1 mL(11201ES03) | 产品价格： | ￥185.00 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 5×1 ml(11201ES08) | 产品价格： | ￥745.00 |
| 规格： | 100×1mL(11201ES60) | 产品价格： | ￥12755.00 |
| 规格： | 50×1mL(11201ES50) | 产品价格： | ￥6755.00 |
产品描述
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox)是2×实时定量PCR扩增的预混合溶液。Mix中含有热启动Hieff® DNA Polymerase、SYBR Green I、dNTPs、Mg2+。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时荧光定量PCR，大大简化操作过程，降低污染几率。
本品采用的DNA聚合酶配体可以随温度变化实时调节DNA聚合酶活性。配方添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子，使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。
适用机型
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.
运输和保存方式
冰袋运输。-20℃避光储存，有效期18个月。
本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存或配制反应体系时需避免强光照射。
注意事项
1. 推荐使用本公司cDNA合成试剂盒（货号：11123ES），以有效去除RNA样品中残留的基因组。
2. 解冻后Master Mix可能出现絮状物质，4℃放置并上下颠倒混匀至溶液澄清，不影响试剂性能。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
4. 本产品仅作科研用途！
反应体系（推荐冰上配制）
|
组分 |
体积（μL） |
体积（μL） |
终浓度 |
|
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox) |
25 |
10 |
1× |
|
Forward Primer (10 μM) |
1 |
0.4 |
0.2 μM |
|
Reverse Primer (10 μM) |
1 |
0.4 |
0.2 μM |
|
模板DNA |
X |
X |
- |
|
无菌超纯水 |
to 50 |
to 20 |
- |
【注】： 使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。
b) 模板浓度：如模板类型为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。
c) 模板稀释：cDNA原液建议5-10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的CT值在20-30个循环为好。
d) 反应体系：推荐使用20 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
【注】: 高特异性可选择两步法，高效率扩增可选择三步法。
a) 预变性时间：根据不同模板和引物的具体情况可适当缩短至2 min。
b) 退火温度和时间：请根据引物和目的基因的长度进行调整。
c) 荧光信号采集（★）：请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置，几种常见仪器的时间设定如下：
30sec以上：Applied Biosystems: StepOne, StepOne Plus, 7500 Fast；Roche Applied Science: LightCycler 480；Bio-Rad: CFX96
31sec以上：Applied Biosystems: 7300
34sec以上：Applied Biosystems: 7500
d) 熔解曲线：通常情况下可以使用仪器默认程序。
结果分析
定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线。
1) 扩增曲线：标准扩增曲线为S型。
Ct值落在20-30之间时，定量分析最准确；
Ct值小于10时，需要将稀释模板后，重新进行实验；
Ct值介于30-35之间时，需要提高模板浓度，或者增大反应体系的体积，以提高扩增效率，保证结果分析的准确性；
Ct值大于35时，检测结果无法定量分析基因的表达量，但可用于定性分析。
2) 熔解曲线：
熔解曲线单峰，表明反应特异性好可以进行定量结果分析；若熔解曲线出现双峰或者多峰，则不能进行定量分析。
熔解曲线出现双峰，需要通过DNA琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。
如果是引物二聚体，建议降低引物浓度，或者重新设计扩增效率高的引物。
如果是非特异性扩增，请提高退火温度，或者重新设计更高特异性的引物。
引物设计指南
1. 推荐引物长度25 bp左右。扩增产物长度150 bp为佳，可以在100 bp-300 bp内选择。
2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。
3. 引物碱基分布要均匀，避免出现连续的4个相同碱基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。
4. 引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。
5. 引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物3’端有2个碱基以上的非特异性互补。
6. 设计完成的引物需要进行扩增效率的检测，只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验[1] Medina-Puche L, Tan H, Dogra V, et al. A Defense Pathway Linking Plasma Membrane and Chloroplasts and Co-opted by Pathogens. Cell. 2020;182(5):1109-1124.e25. doi:10.1016/j.cell.2020.07.020(IF:38.637)
[2] Wan S, Ni L, Zhao X, et al. Costimulation molecules differentially regulate the ERK-Zfp831 axis to shape T follicular helper cell differentiation. Immunity. 2021;54(12):2740-2755.e6. doi:10.1016/j.immuni.2021.09.018(IF:31.745)
[3] Han X, Wang R, Zhou Y, et al. Mapping the Mouse Cell Atlas by Microwell-Seq [published correction appears in Cell. 2018 May 17;173(5):1307]. Cell. 2018;172(5):1091-1107.e17. doi:10.1016/j.cell.2018.02.001(IF:31.398)
[4] Tang Y, Fang G, Guo F, et al. Selective Inhibition of STRN3-Containing PP2A Phosphatase Restores Hippo Tumor-Suppressor Activity in Gastric Cancer. Cancer Cell. 2020;38(1):115-128.e9. doi:10.1016/j.ccell.2020.05.019(IF:26.602)
[5] Chang D, Xing Q, Su Y, et al. The Conserved Non-coding Sequences CNS6 and CNS9 Control Cytokine-Induced Rorc Transcription during T Helper 17 Cell Differentiation. Immunity. 2020;53(3):614-626.e4. doi:10.1016/j.immuni.2020.07.012(IF:22.553)
[6] Wang X, Ni L, Wan S, et al. Febrile Temperature Critically Controls the Differentiation and Pathogenicity of T Helper 17 Cells. Immunity. 2020;52(2):328-341.e5. doi:10.1016/j.immuni.2020.01.006(IF:22.553)
[7] Xiao J, Li W, Zheng X, et al. Targeting 7-Dehydrocholesterol Reductase Integrates Cholesterol Metabolism and IRF3 Activation to Eliminate Infection. Immunity. 2020;52(1):109-122.e6. doi:10.1016/j.immuni.2019.11.015(IF:21.522)
[8] Zhao X, Di Q, Yu J, et al. USP19 (ubiquitin specific peptidase 19) promotes TBK1 (TANK-binding kinase 1) degradation via chaperone-mediated autophagy. Autophagy. 2022;18(4):891-908. doi:10.1080/15548627.2021.1963155(IF:16.016)
[9] Sun Z, Tang Y, Zhang Y, et al. Joint single-cell multiomic analysis in Wnt3a induced asymmetric stem cell division. Nat Commun. 2021;12(1):5941. Published 2021 Oct 12. doi:10.1038/s41467-021-26203-0(IF:14.919)
[10] Meng YM, Jiang X, Zhao X, et al. Hexokinase 2-driven glycolysis in pericytes activates their contractility leading to tumor blood vessel abnormalities. Nat Commun. 2021;12(1):6011. Published 2021 Oct 14. doi:10.1038/s41467-021-26259-y(IF:14.919)
技术资料需要更多技术资料 索取更多技术资料
