- ￥1365
- 翌圣生物（Yeasen）
- 11208ES03
- 上海翌圣
- 2025年10月16日
企业认证
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![探针法2×实时定量PCR扩增预混液 qPCR TaqMan Probe Master Mix[可申请试用]](https://img1.dxycdn.com/2019/0531/479/3348497731122979574-14.jpg!wh200)
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Hieff Unicon® TaqMan multiplex qPCR master mix
- 保质期：
有效期1年
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
1mL
本产品是2×Mix预混合试剂，能够实现在单个反应孔中进行多重荧光定量PCR。本产品含有基因改造的热启动Taq酶，极大地提高了扩增灵敏度和特异性，本产品对多重反应缓冲体系进行了深度优化，能够提高反应的扩增效率，促进低浓度模板的有效扩增。本产品可用于基因分型和基因多重定量分析。
产品组分
| 组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
|||
| 11208ES03 (1 mL) |
11208ES06 (5 × 1mL) |
11208ES08 (5 mL) |
11208ES60 (20×5 mL) |
||
| 11208-A |
2×Hieff Unicon® TaqMan Multiplex qPCR Master Mix |
1 mL |
5 × 1 mL |
5 mL |
20 × 5 mL |
| 11208-B |
50×Low Rox |
40 μL |
200 μL |
200 μL |
20 × 200 μL |
| 11208-C |
50×High Rox |
40 μL |
200 μL |
200 μL |
20 × 200 μL |
运输和保存方法
冰袋运输。-20°C储存，有效期18个月。
反应体系
| 组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
| Hieff Unicon® TaqMan Multiplex qPCR Master Mix |
10 |
1× |
| Primer mix |
x |
0.1-1 μM |
| TaqMan Probe mix |
y |
50-300 nM |
| 50×Low or High Rox |
0.4 |
1× |
| 模板DNA/cDNA |
1-100 ng |
- |
| ddH2O |
up to 20 |
- |
【注】
a. 上表中模板量和引物浓度以及探针浓度均为推荐量，可根据具体实验情况进行调整，选择最适投入量和浓度
b. 一般情况下，每条引物浓度为 0.2 μM 即可得到较好的扩增效果，引物浓度可在 0.1-1 μM 的范围内进行调节；
c. 反应体系可根据实验需求进行等比例调节，模板体积不超过总体积的 1/10。
适用机型
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.
参考扩增程序
| 循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
| 预变性 |
95°C |
5 min |
1 |
| 变性 |
95°C |
5 sec |
40 |
| 退火/延伸 |
60°C |
30 sec |
【注】
a. 某些情况下，可通过调节退火延伸时间提高多重 qPCR 反应的性能；
b. 反应结束后可通过琼脂糖凝胶电泳确认产物的特异性；
注意事项
1. 请于使用前确保产品完全解冻并彻底混匀，短暂离心收集至管底后置于冰上备用。
2. 为避免样品间交叉污染和气溶胶污染，推荐在超净台中进行反应体系的配制。
3. 使用过程中避免产品的反复冻融。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
HB220808
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文献和实验[2] Zhang Y, Fang Z, Guo X, et al. lncRNA B4GALT1-AS1 promotes colon cancer cell stemness and migration by recruiting YAP to the nucleus and enhancing YAP transcriptional activity. J Cell Physiol. 2019;234(10):18524-18534. doi:10.1002/jcp.28489(IF:4.522)
[3] Li H, Liu F, Qin W. Circ_0072083 interference enhances growth-inhibiting effects of cisplatin in non-small-cell lung cancer cells via miR-545-3p/CBLL1 axis. Cancer Cell Int. 2020;20:78. Published 2020 Mar 12. doi:10.1186/s12935-020-1162-x(IF:4.175)
[4] Zhao W, Wu M, Cui L, Du W. Limonin attenuates the stemness of cervical carcinoma cells by promoting YAP nuclear-cytoplasmic translocation. Food Chem Toxicol. 2019;125:621-628. doi:10.1016/j.fct.2019.02.011(IF:3.775)
[5] Cao X, Zhang C, Zhang X, Chen Y, Zhang H. MiR-145 negatively regulates TGFBR2 signaling responsible for sepsis-induced acute lung injury. Biomed Pharmacother. 2019;111:852-858. doi:10.1016/j.biopha.2018.12.138(IF:3.743)
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值，在操作过程中，还需要根据所用
成功做完了逆转录，这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多，即使使用了 qPCR 预混液，也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列（Q411 /Q421 /Q431 /Q441）提供不同颜色的试剂，利用移液过程中的变色效应，追踪移液过程，可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时，引物设计需遵循以下原则：引物长度 18～25bp，产物长度 80～300bp，GC 含量 40～60
，切除标签，并通过质谱仪检测。如果你们实验室没有质谱仪，而又想开展多重分析，那么下面的一些方案可能适合你。 罗氏应用科学部的Light Cycler 480 Probes Master Mix能成功支持4重反应，甚至达到5重。这是一种即用型的反应预混液，包含了FastStart Taq 热启动型DNA聚合酶，它能减少非特异产物的形成，从而显著改善PCR的特异性和灵敏度。 Bio-Rad的iQ Multiplex Powermix能检测最多4个目标，即使它们的表达量相差106倍
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