EMSA突变探针-OCT-1

电泳迁移实验(EMSA)方法

。 5. 电泳分析：EMSA的典型分析结果可以参见下面的图1。 图1. 一个典型的EMSA/Gel-Shift分析图 1，阴性对照反应（标记探针）；2，常规反应（含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针）；3，探针冷竞争反应（含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+标记探针100倍量的未标记探针）；4，突变探针的冷竞争反应（含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+标记探针100倍量的未标记突变探针）；5，Super-shift反应（含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+目的转录因子的特异

非放射EMSA实验技术讨论

EMSA是一个比较复杂的试验技术,由于工作原因接触这个试验技术到现在也有三年多的时间了,做了大概也有几百次吧, 那倒理想的试验结果的同时也碰到了很多莫名的问题和结果,到现在为止还有没有解决的,找不到原因的一个问题,呵呵! 现和smalldonkey商量一下将我对这个实验技术的总结和一个心得写出来给大家分享,批评指正。EMSA实验技术作为一个经典的DNA/protein,RNA/protein的检测技术,不是很多简单的实验技术可以替代的! 比如曾经在我们这个论坛中有站友提到

EMSA又失败了？别急着重复，先对照这5个环节排查一遍

参数：标记效率建议≥90%，否则游离探针信号过强可能掩盖复合物条带。     04 仅使用标记探针，缺少必要的对照体系   这是EMSA实验中较常见的疏漏之一， 可靠EMSA结果需同时设置以下对照： 冷竞争探针（未标记相同序列）：验证特异性——过量冷探针能有效竞争迁移带，方可判断为特异性结合 突变探针（关键碱基替换）：验证序列依赖性——突变后条带消失，说明结合具有序列特异性 无关阴性探针（随机序列）：用于排除非特异性吸附 缺乏上述对照的EMSA结果，其可靠性较为有限