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105 pmol
2、野生探针、突变竞争探针使用探针的工作液浓度为 1pmol/ul。
3、本产品探针可与其他商业化 EMSA 试剂盒配用,也可用于用户自配试剂的 EMSA 实验当中。具体使用方法请参加 EMSA 试剂盒说明书或 EMSA protocol。
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文献和实验五、RNA探针制备(根据the DIG system user's guide) A. 地高辛标记的体外转录 试剂及其配制(试剂盒提供): 10× NTP标记混合物:in Tris-HCl (pH 7.5) 10mmol ATP 10mmol CTP 10mmol GTP 6.5mmol UTP 3.5mmol DIG-UTP 10× 转录缓冲液:400mmol Tris-HCl(pH 8.0) 60mmol MgCl
Northern杂交试验指导手册-为制备RNA探针模板的DNA片断亚克隆
A. 载体选择 为了获得能够在体外转录RNA探针的DNA模板,其克隆载体必须带有可供选择的特异转录启动子,同时,为了获得理想的Northern杂交试验结果,载体选择带有两种不同类型而方向相反启动子的载体,以便在RNA探针制备时同时得到两条链的转录探针。 常用的这类载体有:pGEM-3/pGEM-4 ( 2.87kb, SP6/T7 ). pGEM-3Z ( 2.74kb, T7/SP6 ). PGEM-3Zf(-) (3.2kb, T7/SP6 ).
/蛋白复合物的电泳带明显减少。 2、为什么实验背景高? 1)曝光或者成像时间过长。 2)封闭时间不足或者效率不高。 3)洗涤效果不佳。 4)实验过程中膜没有一直处于湿润状态。 3、EMSA测定需要多少量的蛋白与标记的探针? 对每一个特定的结合蛋白和探针,所用的纯化蛋白,部分纯化蛋白,粗制核抽提液需作优化:一般所用纯化蛋白的量在20-2000ng间,可将蛋白:DNA的等摩尔比调整为蛋白的摩尔数是DNA的5倍;用粗制核抽提液,需要2-10ug蛋白形成特异的复合物。 部分








