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- 详细信息
- 用户评价
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
QIAamp DNA FFPE Advanced Kit (50)
- 供应商：
QIAGEN/凯杰
- 规格：
50次/盒
FFPE样本的核酸在甲醛固定、石蜡包埋及储存过程中发生降解和片段化，并产生核酸之间、蛋白之间及核酸和蛋白之间的交联，给其中DNA提取带来很大挑战。
在FFPE样本核酸纯化时，首先需进行彻底脱蜡，传统常使用二甲苯等有机溶剂，QIAamp DNA FFPE Advanced Kit采用非有机溶剂的脱蜡液，减少对人体伤害的同时可节省空间。
试剂盒优化了高温解交联的条件，最大化保证了DNA片段完整性并大大缩短了时间。
实验流程进一步优化，使用两步蛋白酶K处理，提高了DNA得率，并采用QIAamp MinElute UCP columns进行纯化，使洗脱体积低至20μl，进一步提高了核酸浓度。
本试剂盒能适用于0.5 mm3 -4 mm3的样本起始量 ，可低至一片FFPE切片，有效应对穿刺等组织含量少的样本。
特征
- 可扩增 DNA 的回收率高
- 无需二甲苯或类似溶剂即可去除石蜡
- 尿嘧啶（脱氨基胞嘧啶）– DNA 提取过程中使用尿嘧啶-N-糖基化酶 (UNG) 进行伪影去除步骤
- 适用于 PCR、数字 PCR (dPCR) 和下一代测序 (NGS) 的即用型 DNA
原则
从 FFPE 组织中制备 DNA 面临三大挑战：
- 由于输入材料有限且 DNA 受损，产量低
- 福尔马林引起的交联导致 DNA 无法扩增
- 脱氨基胞嘧啶伪影可能导致 NGS 突变分析产生错误结果
QIAamp DNA FFPE Advanced Kits 通过两种方式从有限的样本输入中大程度地提高 DNA 产量：
- 通过实施两步裂解程序，即使从难以裂解的样本中也能确保高 DNA 提取率
- 通过使用脱蜡溶液代替基于溶剂的石蜡去除，省去了初始裂解前的所有清洗步骤，从而最大限度地降低了丢失稀缺样品材料的风险
交联去除进一步提高了可扩增 DNA 的回收率
QIAamp DNA FFPE 高级工作流程。
QIAamp DNA FFPE Advanced 程序使用脱蜡溶液代替二甲苯或任何其他溶剂，从而去除石蜡，无需经过多个繁琐的清洗步骤。
裂解使用蛋白酶 K 进行。交联通过在 90°C 下加热孵育 1 小时来去除。可以使用 UNG 去除伪影。
然后消化 RNA，并再次裂解样品以增加 DNA 回收率。
DNA 与 QIAamp UCP MinElute 离心柱结合。使用缓冲液 AW1、缓冲液 AW2 和乙醇洗掉污染物，并在缓冲液 ATE 中洗脱 DNA。
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文献和实验[1] Santos M J A ,Unen V V ,Lin Z , et al. A human autoimmune organoid model reveals IL-7 function in coeliac disease [J]. Nature, 2024, 632 (8024): 401-410.
实验步骤 1. Protocol for FFPE Extraction 1) cut a approximately 10 mg FFPE sample into a 2 ml collection tube or suitable vessel, cut off the Samples tiny and remove the paraffin wax as far as possible.
miRNeasy FFPE Kit (50) 50次 217504 DNA 纯化 QIAamp DNA FFPE Kit(50) 50次 56404 全基因组扩增 REPLI-g
Whole Genome Amplification of DNA Extracted from FFPE Tissues
Whole Genome Amplification Kit, to amplify DNA directly from archived tissue. In addition, this chapter documents our unique experience with the utilization of GenomePlex� amplified DNA using several molecular techniques including metaphase Comparative Genomic
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