PURExpressTM 体外蛋白合成试剂盒

♦  Solution A （黄色）
♦ Solution B （红色）
♦  对照（DHFR）模板
♦ 通用引物

 

PURExpress 试剂盒基于 PURE 系统技术，PURE 技术最早由东京大学 Takuya Ueda 博士发明，Post Genome Institute（PGI）（日本，东京）商业化为 PURESYSTEM^® 。

 

PURExpress^TM 体外蛋白合成试剂盒是新型无细胞转录/翻译系统，用于基因快速表达分析，是由大肠杆菌翻译所必需组份纯化而构成。 PURExpress系统中的所有活性组份都来自于重组，避免了核酸外切酶、RNA 酶和蛋白酶的污染，避免了模板 DNA的降解以及蛋白的修饰及降解。转录和翻译过程仅需将两管试剂混合，一步反应即可完成，几个小时就可观察实验结果，PURExpress 系统大大地节省了宝贵的实验时间，特别适合于高通量技术。

♦ 无样品降解
♦ 适用于环状或链型模板
♦ 合成的蛋白经考马斯亮蓝染色可见
♦ 仅需 1 小时即可完成表达蛋白
♦ 转录/翻译的组份通过亲和层析即可去除
♦ 试剂可多次冻融

 

 

使用 PURExpressTM 体外蛋白合成试剂盒表达蛋白质。
25 μl 反应体系中加入 250 ng 模板 DNA 和 20 单位 RNA 酶抑制剂，37 ℃ 反应 2 小时。各取 2.5 μl 反应液，进行 10－20％Tris－甘氨酸 SDS－PAGE 电泳分析。红点处指示的为目的蛋白。Marker M 是蛋白质分子量标准（NEB #P7703）。

 

使用 PURExpress 表达并反向纯化 DHFR（A）和 T4 DNA 连接酶（B）。
根据随试剂盒提供的使用手册中建议的方法，建立 125 μl 反应体系。进行 10－20％ Tris-甘氨酸 SDS-PAGE 电泳（考马斯亮蓝染色）分析。注：在总蛋白中均能观察到各自表达的目的蛋白。红点处指示的为目的蛋白。Marker M 是蛋白质分子量标准（NEB #P7703）。