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概述
pTXB1 和 pTXB3 是用于 IMPACTTM 试剂盒（NEB#E6901）的大肠杆菌表达载体，携带有一个小的蛋白剪切元件即来自 Mycobacterium xenopi gyrA 基因的 mini 内含肽【Mxe Gy rA 内含肽，2 2 kDa（3，6）】。蛋白自剪切元件经修饰后与来自芽孢杆菌（Bacillus circulans）（4）的几丁质结合域（CBD）一起共同形成一个内含肽标签。目的蛋白与内含肽标签融合表达后，形成的重组融合蛋白与几丁
质珠（NEB #S6651）结合，从而与其它蛋白成分分离。使用硫醇试剂（如DTT）或 MESNA（2-mercaptoethanesulfonic acid）（后续连接用）可诱导内含肽标签从目的蛋白上裂解。pTXB 载体系列可用于蛋白纯化、连接和标记。pTXB1 与 pTXB3 载体只是在多克隆位点处有
所不同。
pMYB5 和 pMXB10 是 IMPACT™ 试剂盒的对照质粒。携带大肠杆菌 mal E 基因，与内含肽标签位于同一阅读框架内。mal E 基因的 5' 和 3' 端均有限制性酶切位点可用于克隆。
pTYB 和 pKYB1 表达载体含有一个蛋白剪切元件。即来自酿酒酵母（Saccharomyce scerevisiae ）VMA1基因的内含肽【Sce VMA内含肽，50 kDa（1,7）】。内含肽标签中含有几丁质结合域，可以与几丁质珠结合，从而使融合有内含肽与几丁质标签的目的蛋白得到纯化。使用硫醇试剂（如 DTT），可诱导内含肽标签从目的蛋白上裂解。
pTYB1, 2, 3 和 4 的内含肽标签融合在目的蛋白的C 端，它们之间只是多克隆位点有所不同。pKYB1质粒和 pTYB1 具有完全相同的内含肽和多克隆位点。但 pTYB 系列载体携带的是 Tn 903 的卡那霉素抗性基因。
pTYB21, pTYB22, pTYB11 和 pTYB12 的内含肽标签（包含 Sce VMA 的内含肽和几丁质结合域）融合在目的蛋白的 N 末端（2,8）。pTYB21 和 pTYB22 之间只是多克隆位点有所不同。这两种载体的多克隆位点均与 NEB 的其它表达系统相兼容。
pTWIN1 和 pTWIN2 载体可以将目的蛋白融合在两个mini 内含肽之间便于进行蛋白纯化和后续操作，如蛋白环化（9）和连接。pTWIN1 载体中的内含肽分别为 Mxe GyrA 内含肽和来自蓝细菌（Synechocystis sp. ）dnaB 基因的 Ssp DnaB 内含肽。pTWIN2 载体
中的内含肽分别为 Ssp DnaB 内含肽和来自嗜热自养甲烷杆菌（Methanobacterium thermoautotrophicum ）rir1基因的 Mth RIR1 内含肽（11）。内含肽-目的蛋白的融和蛋白可通过几丁质结合域结合到几丁质珠上，便于纯化。分离洗脱目的蛋白可通过改变 pH 值和温度后，再加入硫醇试剂来进行。pTWI N1 和pTWIN2 载体的多克隆位点信息请见 NEB 网站。
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参考文献
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(2) Chong, S. et al. (1998) Nucleic Acids Res ., 26,5109–5115.
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(7) Chong, S. et al. (1996) J. Biol. Chem ., 271,22159–22168.
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(9) Evans, T.C., Benner, J., and Xu, M. -Q. (1999)J. Biol. Chem ., 274, 18359–18363.
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(12) Studier, F.W. et al. (1990). In D.V. Goeddel (Ed.),Methods in Enzymology Vol. 185, (pp. 60–89). SanDiego: Academic Press.
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文献和实验
技术资料