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文献和实验流式细胞仪、免疫磁珠及亲和板结合分离法分选c kit+肝癌细胞的比较
季青公司;兔抗人c kit多克隆抗体、FITC标记的羊抗兔IgG(1∶200)购自丹麦Santa Cruz公司;抗兔IgG1免疫磁珠购自德国Miltenyi Biotech公司;其他常用试剂为国产分析纯。 1.1.4 主要仪器:免疫磁珠分选磁力架、MS磁性分离柱购自德国Miltenyi Biotec公司;Epics Altra型流式细胞仪购自美国Beckman Coulter公司;各种常用耗材购自广州威佳科技公司。1.2 方法 1.2.1 分离、培养肝癌细胞:参考文献方法,分离
产生。例如,特异性抗体和抗酶抗体均由兔产生,再用羊抗兔IgG作为桥抗将两者连接起来。 PAP法的基本原理与酶桥法相似,均是利用桥抗将酶连接在第一抗体结合的部位,所不同的是,先将酶(过氧化物酶)和抗酶(过氧化物酶)抗体(PAP)制成复合物,以代替酶桥法中的抗酶抗体和随后结合的酶,将两步合并为一步。这一重要的改进,不仅简化了操作步骤,而且大大提高了敏感性。PAP法的不足之处是反应步骤多,需时长,在实际操作中,会带来非特异性放大效应。亲和免疫组织化学结合了免疫酶组织化学在待检抗原部位形成有色沉淀和亲和组织
第1节- 试剂1.1涂层缓冲液PBS(137 mM氯化钠,2.7 mM的氯化钾,8.1 mM的磷酸氢二钠,1.5 mM磷酸二氢钾)1.2封闭液5%脱脂乳于PBST中(0.05%Tween-20)1.3稀释剂2%脱脂乳于PBST中(0.05%Tween-20)1.4柠檬酸缓冲液3.65克柠檬酸,4.76克磷酸氢二钠,溶解于500毫升双蒸水1.5兔抗GST抗体兔抗GST抗体1.6 HRP结合山羊抗兔IgG(H + L)山羊抗兔IgG(H + L),結合过氧化物酶第2节- 分析方法注:以下方法是一个
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