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甲胎蛋白放免试剂盒操作说明书

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  • XY-301
  • 2025年07月04日
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      上海信裕

    甲胎蛋白放免试剂盒操作说明书
    AFP（HY-013） RIA KIT
    临床意义：
    甲胎蛋白(AFP)是人血清α球蛋白,分子量为68000。在胎儿发育中，由卵黄囊和胎儿肝脏产生。出生后逐渐下降至正常水平，当发生原发性肝癌和胎儿重大畸型时，AFP水平增加很多。药盒对诊断肝癌具有专-性。另外测定母亲血液和胎儿羊水中AFP浓度可判断胎儿是否正常。本药盒采用放射免疫分析方法应用免疫分离剂，可测定血清、羊水、脐血中AFP的含量。
    样品采集：
    取晨空腹的静脉血，取血清，放4-8 C可保存一周，脂血样品影响测定结果。
    药盒组成:
    1、125I-AFP 1瓶。
    2、AFP抗体 1瓶。
    3、标准品 7瓶，即为0、10、20、50、100、200、400 ng/ml。
    4、免疫分离剂（第二抗体） 1瓶。
    甲胎蛋白放免试剂盒操作说明书操作方法：
    试管编号，按下表程序操作。
    AFP RIA 加样步骤 （ 单位: ul）
    管 别
    标准品
    样品
    125I-AFP
    抗血清
    混匀，37℃温育3小时，任取三管测总T（CPM）。
    分离剂
    NSB管
    200（S0）
    --
    100
    --
    500
    S0管
    100
    --
    100
    100
    500
    S1-S末管
    100
    --
    100
    100
    500
    样品管
    --
    100
    100
    100
    500
    混匀，室温放置15分钟，离心（3500转/分）15分钟，吸弃上清液，测定各管沉淀的放射性计数（CPM）。
    甲胎蛋白放免试剂盒操作说明书数据处理：
    1、 计算机处理：建议函数模型采用三次多项式或log～logit法。
    2、 计算、绘图法：
    计算各管的百分率：以S0（cpm数）为B0，各标准管Si（cpm数）为Bi，求各管的百分结合率。
    Bi Bi管（cpm）—NSB管（cpm）
    — %= —————————————— ×100
    B0 B0管（cpm）—NSB管（cpm）
    （1）线性回归：用logX～logitY回归，求出r、a、b值，样品含量可由下式计算得出。
    -a+logit Y
    Log X= ————
    b
    （2）绘图法：用各标准点计算的结果，在log～logit坐标纸上绘制标准曲线图，未知样品浓度可根据Bi/B0的百分结合率从标准曲线图上查出。
    正常叁考值：
    AFP＜20ng/ml（20цg/L）。
    正常人血清中AFP一般在（2～8）ng/ml，但由于许多疾病特别是肝炎都会影响血清中AFP的含量，因此AFP的正常值一般在20ng/ml以下，若被测血清中AFP浓度高，可用生理盐水进行稀释，测得的值乘以稀释倍数。
    甲胎蛋白放免试剂盒操作说明书技术特性：
    1、曲线范围：（10～400）ng/ml（10～400цg/L）。
    2、灵敏度： < 2.5ng/ml（2.5цg/L）。
    3、特异性：AFP抗血清与类似物的交叉反应合格。
    4、精密度：批内CVw<6%，批间CVb<11%
    保存及有效期：
    药盒于（2～8）℃避光保存，切勿冻存。自检定合格之日起有效期为45天。
    药盒参考数据：
    指标
    B/T（%）
    Bi/B0(%)
    项目
    NSB
    S0
    S1
    S末
    参数
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        高效转染试剂盒说明书.pdf       关于百恩维生物  

    • 实验操作篇

      ，不能得到足够的菌量来抽提质粒，摇菌时间一般 12-14 小时为宜。 ③质粒属于低拷贝类型，导致收集的细菌量过少。 ④提取时菌量过多：容易导致裂解不充分，且容易超过硅胶膜柱的承载上限，最终使得质粒提取效率降低，建议参考提取试剂盒建议的菌液量来提取。 ⑤质粒提取实验操作不当：比如在加入缓冲液重悬菌体时，菌体没有充分分散悬浮，导致后续裂解不充分。为指示菌体是否充分裂解，可以考虑在重悬缓冲液中加入指示剂（QIAGEN 质粒提取试剂盒中均有配备 LyseBlue 指示剂），均匀蓝色指示悬浮充分。 ⑥试剂使用

    • CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 293FT 细胞转染验证 and trouble shooting

      %；2. 72 h 后收集细胞提取基因组 DNA（按照基因组 DNA 提取试剂盒的说明书操作）；3. 使用事先设计好的引物进行 PCR 扩增，这里使用的酶是 NEB 公司的 Q5 high-fidelity Polymerase，一切按照该酶的说明书严格操作；4. 将目的条带切割下来并使用胶回收试剂盒回收 DNA 条带，一切按照胶回收试剂盒说明书进行操作；5. 回收后的 DNA 样本，经 T7 Endonuclease I 酶解验证错配 DNA，部分结果如下：T7 EI验证成功，开始正式实验时间飞逝，上次说

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