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- 详细信息
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期:
有效期1年
- 英文名:
Coomassie Brilliant Blue R250
- 库存:
大量
- 供应商:
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 保存条件:
室温运输和保存即可
- 规格:
10g
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格(元) |
| Coomassie Brilliant Blue R250 考马斯亮蓝R250 | 20310ES10 | 10g | 室温 | 189.00 |
产品描述
考马斯亮蓝(Coomassie brilliant blue)是两种相似三苯甲烷染料的总称,有G250和R250两种,结构上前者比后者多了2个甲基,命名上 “G”为Green 的缩写,因G250的蓝色染料泛浅绿色;命名上“R”为Red的缩写,因R250的蓝色染料呈微红色调;“250”表示考马斯亮蓝的纯度。生化实验中常将考马斯亮蓝用于蛋白定量和蛋白电泳中蛋白染色。工作原理是:通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的静电结合作用以及范德华力,考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子(如磺酸基),从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。
考马斯亮蓝R250(Coomassie brilliant blue R250)更多用于电泳蛋白的染色,染色灵敏度比氨基黑高5倍,可达0.1µg蛋白。R250染色后需要褪色,才能进行蛋白条带的观察。
考马斯亮蓝G250的检测灵敏度虽然较低,但也可替代R250,使用一种快速而简单的方法进行蛋白染色。因其具有以下特性,即在低于pH 2.0时,溶液无色;pH 7.0时溶液呈深蓝黑色;若发生酸化,溶液呈现透明的棕褐色。当G250与蛋白结合,溶液又回到蓝色,主要因为蛋白分子周围具有更偏中性的pH环境。合适条件下,当把胶放在酸化的G250溶液中染色,显示出蓝色的蛋白条带,背景呈浅琥珀色。此种方法条带快速显色,且背景颜色也很浅使得条带看起来很清楚,则不需要做褪色处理。大部分蛋白用G250检测的下限是0.5µg。虽然灵敏度降低,取而代之的是操作快速以及方便,比R250染色节省高达11 h。
产品性质
| 中文别名(Chinese synonym) | 考马斯亮兰R250;酸性蓝83;酸性艳蓝6B;亮蓝R; |
| 英文别名(English synonym) | Brilliant Blue R; Brilliant Indocyanine 6B; C.I. number 42660; Acid Blue 83; |
| CAS号(CAS NO.) | 6104-59-2 |
| 分子式(Formula) | C45H44N3NaO7S2 |
| 分子量(Molecular weight) | 825.97 |
| 外观(Appearance) | 暗红色至深暗红或暗色粉末 |
| 溶解性(Solubility) | 溶于热水(1 mg/ml),乙醇和甲醇 |
| 结构式(Structure) | ![]() |
运输与保存方法
室温运输和保存即可。
使用方法
- 标准染色步骤(考马斯亮蓝R250)
- 蛋白电泳凝胶置于50%甲醇,10%醋酸,40%水溶液中固定,水平摇床上低速摇动30min~过夜;
- 去除固定液,更换0.25%考马斯亮蓝R250染色液(0.25% R250 溶于50%甲醇,10%醋酸,40%水溶液)完全覆盖住胶,染色2-4h。直至胶染成均匀的蓝色。注意:当胶在染色液内肉眼不可见时,说明染色完成,否则与深色的染色液对比,凝胶区域看起来颜色偏浅。
- 将胶重新放置在5%甲醇,7.5%醋酸,87.5%水溶液中脱色4-24h。约1-2h后蛋白条带即可看到,直至背景变透明后脱色才结束。中间可更换2-4次脱色液;
- 此方法可检测到的蛋白量最低达到0.1µg蛋白/条带。
- 将胶存放在7%醋酸中。也可以放在水中或者干燥保存。
- 快速染色步骤(考马斯亮蓝R250)
- 蛋白电泳凝胶在25%IPA,10%醋酸的水溶液中固定30-60min;
- 将胶放置在10%醋酸的水溶液中进行染色,含有60 µg/ml的考马斯亮蓝R250。约30min后条带显示,让胶继续染色直至达到理想的蛋白条带。在此染色方法中胶的背景染色比较浅,由于使用胶的浓度很低。
- 将胶重新放在10 %醋|酸|溶液中脱色2h或更长。期间可更换2-4次脱色液;
- 将胶存放在7%醋酸中。也可以放在水中或者干燥保存。
注意事项
1)0.25%考马斯亮蓝R250染色液配置的过程中,需要先用甲醇溶解R250粉末后,再加入醋酸和水,一般情况下不需要滤纸除杂。溶液可在4度存放6个月,若长时间保存出现沉淀,可用滤纸过滤得到澄清液体。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验一般R250 染蛋白,G250 一般测蛋白浓度,也可染胶,敏感性更高但较慢脱色较难。 G250常用的蛋白染料,作定性试验用,染色后为蓝绿色;R250较敏感,,做定量实验用,染胶效果较好.染色后为红蓝色 考马斯亮蓝R250(Coomassie brilliant blue R250)。C45H44O7H3S2Na,MW=824,λmax
nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,最小可测2.5μg/mL蛋白质,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。 考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝
。微丝是肌动蛋白亚单位组成的螺旋状纤维(F-actin),直径为6~7 nm,又名肌动蛋白丝,其长度不定,多分布在近细胞膜 的下方。微丝在不同种类的细胞中,它们又与某些结合蛋白一起形成不同的亚细胞结构,如张力纤维(stress fiber)、肌肉细丝、肠上皮绒毛轴心等。现在观察微丝可以用电镜、组织化学、免疫细胞化学等手段。本实验用考马斯亮蓝R250(coomassie brilliant blue R250)显示微丝组成的张力纤维。张力纤维在体外培养细胞中普遍存在,于活体内哪些细胞具有张力纤维研究











