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- 免疫荧光双标三色（漂片） 厚组织类器官双靶蛋白标记共聚焦三维成像实验外包
- 全国
- 2026年07月06日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海经科化学科技有限公司
- 服务名称：
免疫荧光双标三色（漂片）
- 规格：
张
一、服务简介
技术优势说明
二、适用样本范围
- 30–200μm 厚度振动切片，切片厚度可按需指定；
- 直径小于 200μm 类器官；
- 厚度小于 200μm 细小神经、血管类微小组织。
三、完整标准实验流程
- 实验动物采用通用型组织固定液灌注固定，取目标组织浸泡固定液 4℃过夜，固定液严禁冷冻结冰；
- 无菌 PBS 缓冲液洗涤组织，单次 5min，共洗涤 3 次；
- 无菌 PBS 浸润样本，4℃环境暂存运输，建议 3 日内送达实验室；
- 振动切片机制备切片；直径 200μm 以内类器官、微小组织无需切片；直径超过 200μm 的类器官需切片处理；
- 漂片双靶蛋白免疫荧光标记；
- 染色完成后开展贴片操作；
- 抗荧光淬灭封片剂封片；
- 超高分辨率白激光共聚焦 3D 多层扫描成像，分层采集各层面荧光信号。
四、样本固定、收集与运输规范
（一）动物组织样本
（二）类器官样本
- 数量标准：同种处理类器官总量不少于 200 个，避免过度生长破坏组织形态；直径超 200μm 类器官需切片；
- 清洗：移除培养基，常温无菌 PBS 清洗两次；
- 固定：每孔添加通用固定液室温固定 1h 后去除液体；
- 冰上操作，预冷含 BSA 的 PBS 溶解基质胶，转移类器官悬液至离心管；
- 1000rpm 离心 3min，弃上清，无菌 PBS 轻柔重悬沉淀；
- 离心管封口、缓冲气袋包裹，4℃轻拿轻放运输，3 日内送检。
通用送检要求
五、交付成果
漂片免疫荧光双标三色共聚焦3D成像全套
漂片免疫荧光3标4色共聚焦3D成像全套
漂片免疫荧光4标5色共聚焦3D成像全套
免疫荧光单标双色（漂片）
免疫荧光双标三色（漂片）
免疫荧光3标4色（漂片）
免疫荧光4标5色（漂片）
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文献和实验对照。 二、注意事项 1、荧光染色后一般在 1h 内完成观察，或于 4℃ 保存 4h ，时间过长，可能会使荧光提前衰退。 2、每次试验均需设置以下三种对照： （1） 阳性对照：阳性血清+荧光标记物； （2）阴性对照：阴性血清+荧光标记物； （3）荧光标记物对照：PBS +荧光标记物。 三、免疫荧光双标的经验之谈 1、选取一抗时，要求来源于两种不同的动物，我用的是来源于家兔和大鼠的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是 donkey anti-rabbit-FITC（绿）和donkey anti
问：神经干细胞nestin和EphrinA4的免疫荧光双标怎么做？答：过程和一般的免疫染色一样就是封闭的时候用两种血清混合封闭1：1加入一抗和二抗的时候也是混合加入但是因为稀释浓度不好掌握最好提前作预试~补充一点，荧光双标记必须选择的一抗抗性不同，如一个是兔多抗，一个是鼠单抗，那么二抗分别采用抗兔，抗鼠的不同颜色标记的荧光二抗即可。
法简便可靠，但灵敏度较低。 (2)间接法双重免疫荧光标记：用未标记的两种特异性第一抗体孵育组织或细胞，洗去多余的第一抗体后，再用两种不同的荧光素分别标记的第二抗体孵育组织或细胞，洗去多余的第二抗体，后在荧光显微镜下分别选择两种相应的激发滤片观察，从而对两种抗原 进行定位和定量。使用此法应注意两种特异性第一抗体必须来源于不同种属，且荧光标记第二抗体的种属必须与第一抗体的种属相匹配。 免疫 荧光双标技术中操作要点和注意事项 一、免疫荧光技术中标本制作的基本程序
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