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细胞膜绿色荧光染色试剂盒(PKH67)

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  • ¥258 - 1528
  • 碧云天(beyotime)已认证
  • C2073
  • 2025年09月26日
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      50次/250次/1000次

    规格:50次产品价格:¥258.0
    规格:250次产品价格:¥698.0
    规格:1000次产品价格:¥1528.0

    碧云天的细胞膜绿色荧光染色试剂盒(PKH67),即Cell Plasma Membrane Green Fluorescence Staining Kit with PKH67,是一种以PKH67为荧光探针,并提供了染色增强剂、能快速灵敏地对细胞膜进行绿色荧光染色和标记的试剂盒。

    本产品和Sigma公司的PKH67 Green Fluorescent Cell Linker Kits for General Cell Membrane Labeling (MINI67, MIDI67, and PKH67GL)的染色原理和使用方法基本一致。

    PKH67是一种新型的可用于细胞膜、外泌体标记和示踪的荧光探针,CAS号为257277-27-3,呈现绿色荧光。PKH67结构上带有很长的脂肪族碳尾(Carbon tails),能稳定插入细胞膜、外泌体膜等的脂质区域。PKH67荧光背景低,脂溶性高,荧光染色效果依赖于细胞与膜的类型,主要用于细胞体外标记、体外细胞增殖研究以及长期的体内外细胞示踪研究。PKH67在体内的荧光半衰期为10-12天,因此PKH67非常适合用于示踪研究,也适合用于细胞毒性实验,可与Propidium Iodide/碘化丙啶(ST511/ST512)或7-AAD (7-氨基放线·菌素D) (ST515)等细胞活力荧光探针联合使用,或者与橙、红色荧光探针例如藻红蛋白、红色荧光蛋白(如RFP、mCherry等)等结合使用[1-2]。碧云天同时提供细胞膜红色荧光染色试剂盒(PKH26) (C2071)。

    PKH67可以稳定地与细胞膜脂质区结合并呈现明亮的绿色荧光。PKH67和细胞膜脂质结合后的激发光谱和发射光谱参考图1。其中,最大激发波长为490nm,最大发射波长为502nm。

    产品细节图片1

    图1.PKH67和细胞膜脂质结合后的激发光谱和发射光谱。

    本试剂盒中的PKH67对细胞的毒性较小,荧光背景低,并且染色细胞后不会使邻近细胞染色,所以除了简单的细胞膜荧光标记外,也被广泛用于体内外的细胞示踪。PKH67标记的细胞形态良好,荧光稳定,可以有效的观察细胞在体外的情况;同时PKH67标记的细胞也可以用于体内观察,可以观察长达数周之久。在细胞增殖中,PKH67的荧光会随着细胞的分裂平均分配到子代细胞中,荧光信号逐级递减。根据这个特性,PKH67也可以用于检测细胞增殖[3-5]。

    本试剂盒提供的Assay Buffer与哺乳动物细胞等渗,且不含去垢剂。在生理pH范围内,PKH67荧光强度通常不受染料定位模式的影响,因此不影响染色效果。但为避免影响细胞活力,不宜将细胞暴露在染色稀释液中过长时间。

    本试剂盒提供了Staining Enhancer,使细胞膜染色更加快速,荧光染色更加明亮,染色背景更低。

    本试剂盒可以直接染色活的细胞或组织的细胞膜,染色时间通常为5-20分钟。对于固定的细胞或组织,通常宜使用配制在PBS中的4%多聚·甲醛固定液(P0099)进行固定,使用其它固定液可能会导致荧光背景较高。本试剂盒对L929细胞的染色效果请参考图2。

    产品细节图片2

    图2.碧云天细胞膜绿色荧光染色试剂盒(PKH67) (C2073)对L929细胞的荧光染色效果图。PKH67染色液加入后37ºC孵育5分钟,然后4ºC孵育15分钟,最后再进行Hoechst 33342染色。PHK67染色呈现非常明亮的绿色荧光,而Hoechst 33342染色呈现蓝色荧光。本试剂盒不提供Hoechst 33342,如有需要,可自行选购Hoechst 33342染色液相关产品(C1022/C1025-C1029)等。实际的染色效果会因为实验条件、检测仪器的不同而存在差异,本图仅供参考。

    96孔板每孔检测体系的总体积为100μl时,或每个流式细胞检测的细胞数为100万时,本试剂盒小包装、中包装和大包装分别可以进行50次、250次和1000次检测。

    包装清单:

    产品编号 产品名称 包装
    C2073S-1 PKH67 (250X) 20μl
    C2073S-2 Staining Enhancer (400X) 20μl
    C2073S-3 Assay Buffer 5ml
    说明书 1份

     

    产品编号 产品名称 包装
    C2073M-1 PKH67 (250X) 100μl
    C2073M-2 Staining Enhancer (400X) 100μl
    C2073M-3 Assay Buffer 25ml
    说明书 1份

     

    产品编号 产品名称 包装
    C2073L-1 PKH67 (250X) 400μl
    C2073L-2 Staining Enhancer (400X) 400μl
    C2073L-3 Assay Buffer 100ml
    说明书 1份

    保存条件:

    -20ºC保存,一年有效。PKH67 (250X)须避光保存。Staining Enhancer (400X)和Assay Buffer也可4ºC保存,至少3个月有效。

    注意事项:

    PKH67 (250X)在-20ºC、4ºC等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可在室温或37ºC水浴片刻至全部融解后,使用BeyoFuge™掌上离心机(5000rpm) (E6686)快速离心3-5秒,使附着在管盖或管壁上的PKH67 (250X)聚集于管底。

    含血清、BSA或BSA类似物的溶液对本PKH67的标记有干扰,须避免。

    PKH67染色时,体系中不能含有叠氮化物或严重抑制细胞正常代谢的毒性物质。

    PKH67 (250X)不宜直接加入到细胞培养液中进行染色,否则将导致异质染色并降低细胞活力。

    荧光酶标仪检测时须使用适合荧光检测的黑板或白板,推荐使用碧云天BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) (FCP966)或BeyoGold™黑色透明底96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) (FCP965)。

    Assay Buffer经过滤除菌处理,在使用时须注意避免微生物污染,否则很可能严重影响染色效果。如果Assay Buffer发生浑浊等明显的微生物污染,就不能继续使用。

    本试剂盒可以对贴壁细胞进行标记,但使用单细胞悬浮液可以获得更均匀的染色。可以将贴壁细胞先消化并收集细胞,重悬后分散制备成单细胞悬液,可获得更佳的染色效果。

    荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

    如果染色时间过长或染色后细胞继续培养,探针也可能进入细胞内而染色其它细胞器的膜。

    本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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