ROS染色

▶ 服务介绍

ROS染色原理是利用荧光探针（如Dihydroethidium，DHE）检测细胞内活性氧（ROS）的水平。ROS主要包括超氧阴离子自由基、过氧化氢、羟自由基等。这些活性氧分子在细胞内参与多种生理和病理过程。在病理条件下，由于活性氧的产生和清除失去了正常平衡，会对组织细胞造成损伤。二氢乙锭（Dihydroethidium，DHE），可自由透过活细胞进入细胞内，并被细胞内的ROS氧化，形成氧化乙锭；氧化乙锭可掺入染色体DNA中，产生红色荧光。根据活细胞中红色荧光的产生，可以判断细胞ROS含量的多少和变化。检测ROS水平常用于凋亡、衰老、自噬、炎症、缺血再灌注损伤、神经退行疾病等领域的研究。ROS染色是活氧检测，组织冰冻切片不能用固定液固定，最好是新鲜组织，ROS阴性细胞仅有较低的荧光强度，ROS阳性细胞有较强的红色荧光。

▶ 实验器材及主要实验试剂

实验器材

主要实验试剂

▶ 实验步骤

1.冰冻切片固定：切片于4%多聚 甲醛固定5min，蒸馏水洗1min；PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
2.冰冻切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内滴加ROS染液(取1mgDihydroethidium于3.1mLDMSO中，得到1mMDihydroethidium)，避光恒温箱37℃孵育30min。
3.DAPI复染细胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。
4.封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
5.镜检拍照：切片于荧光显微镜下观察并采集图像。（紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm；FITC绿光激发波长465-495nm，发射波长515-555nm；CY3红光激发波长510-560，发射波长590nm）。