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        ROS流式检测QA

        相关实验:流式细胞术检测实验

        互联网

        13528

        1、现在做肿瘤细胞内ROS水平测定,使用流式细胞仪测DCF荧光强度,应该用什么做对照呢?就是这种肿瘤细胞的正常细胞做对照吗?可不可以用任意的正常组织细胞做对照呢?或者只用PBS加DCFH-DA作为空白对照呢?

        据经验,DCFH-DA本身没有荧光,可穿过细胞膜进入细胞,在胞内转化生成DCFH。在活性氧作用下,DCFH被氧化生成荧光物质DCF,荧光强度与细胞内活性氧水平成正比。你是要测定细胞内活性氧水平,做的是流式细胞检测。建议你设立2组,疾病和正常组,其中各有一个对照:组内的对照是为了排除自发荧光的影响,设置疾病组和正常组是为了比较ROS水平是否显著改变。

        肿瘤细胞+DCFH-DA 和 肿瘤细胞+等量PBS 为一组

        正常细胞+DCFH-DA 和 正常细胞+等量PBS为一组

        顺便提一下,最好用相同类型正常细胞做对照!因为不同类型细胞间的ROS水平本身就存在差异。

        首先要搞清楚你要做什么? 再讨论对照是什么的问题。

        如果单纯检测细胞活性氧的基值,这个很难定义应该用什么细胞做对照,肿瘤细胞在永生化后与原正常细胞或是永生化前已经发生了改变,它并不能反应机体内肿瘤组织的肿瘤细胞的水平,所以与正常细胞比没有什么意义。所以,这种测基值的实验基本没有什么意义。也不用讨论对照是什么了。

        其实,针对培养细胞,测活性氧最常用的就是用药物刺激细胞,再比较刺激前后的活性氧变化,这时,对照显而易见就用非刺激的细胞。

        2、现在用DCFH-DA标记检测PC12细胞内的ros,但是为什么出现双峰呢?请各位不吝赐教

        当然是双峰了,DCFH-DA进入细胞内被ros分解后才的物质才能发出荧光的,没被分解的那部分自然落在阴性去了。

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