免疫组化（不含一抗）

▶ 服务介绍

免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry,IHC)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)免疫组织化学。

▶ 服务介绍

1.采用进口abcam、CST、Santa、omnimabs抗体；
2.具有多年免疫组化实验经验；
3.可免费使用我司细胞库、组织库已有细胞或石蜡切片，无需购买；
4.提供完整的实验数据及实验报告(包括实验仪器、试剂、方法步骤、结果、数据分析、结论等)。

▶ 实验流程

客户提供：新鲜样本/固定后的样本/包埋后的蜡块/切片和一抗，新鲜样本干冰运输；固定液样本、蜡块常温运输；石蜡切片、细胞爬片、组织芯片冰袋运输；冰冻切片冰袋+干冰运输；抗体冰袋运输。

▶ 实验步骤

1.石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ 5min-二甲苯Ⅱ 5min-二甲苯 II5min-无水乙醇 1min-95%乙醇 1min-85%乙醇 1min-75%乙醇 1min-65%乙醇 1min，自来水洗。
2.抗原修复：将 EDTA 抗原修复液（PH9.0）用蒸馏水稀释 50 倍，并加热至沸腾。将脱蜡水化后的切片置于耐高温染色架上，放入不锈钢锅中；将功率调至最小(处于保温状态)，盖上锅盖，继续加热 20 分钟后，离开热源，自然冷却 10 分钟；用自来水冲淋不锈钢锅外壁使之冷却，待锅中液体冷却至室温后取出切片;蒸馏水冲洗 3 分钟x3 次；用 PBS 溶液冲洗 3 分钟 x3 次；
3.灭活：除去 PBS，在切片上滴加内源性过氧化物酶阻断剂，室温下孵育 10 分钟，用PBS 溶液冲洗 3 分钟 x3 次；
4.封闭：除去 PBS，在切片上滴加 5%BSA 封闭液室温下孵育 30min；
5.加一抗：轻轻甩掉封闭液，切片上滴加第一抗体，室温孵育 1h，PBS 冲洗 3x3 分钟；
6.加二抗：除去 PBS，切片上滴加与一抗相应种属的二抗（HRP 标记），室温下孵育30 分钟，PBS 冲洗 3x3 分钟；
7.DAB 显色：除去 PBS，切片上滴加新鲜配制的 DAB 显色试剂显色（5min），显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色， 自来水冲洗切片终止显色。
8.复染细胞核：苏木素复染 5min 左右，自来水洗，1%盐酸乙醇分化数秒，自来水冲洗， 1%氨 水返蓝，自来水冲洗。
9.脱水封片：将切片依次放入 65%乙醇 1min-75%乙醇 1min-85%乙醇 1min -95%乙醇-无水乙醇 1min -二甲苯Ⅰ 5min 中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。
10.显微镜镜检，图像采集分析。结果观察： 苏木素染细胞核为蓝色，DAB 显出的阳性表达为棕黄色

▶ 结果展示
小鼠肠ki67-20×

小鼠脑ki67-20×

小鼠肾ki67-20×