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速度快,无需其它有机试剂辅助,例如:柱平衡液、质粒结合液、氯仿、异 戊 醇、异丙醇等。(注:仅需P1、P2、P3即可释放质粒,结合柱收集质粒。)【负压时间≤15min / 离心时间≤20min / 样品100~150ml / 洗脱1.5~2ml / 产量1.5~2mg / 内毒素0.1EU\μg】
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文献和实验真香!用 qPCR 做外泌体研究,南京医科大学拿下 41 分 SCI
。 2)RNA 提取 外泌体 RNA 可以用专用的外泌体 RNA 提取试剂盒提取,也可以用 Trizol 法提取,建议 Trizol 与外泌体的体积比不小于 4:1(也可以用 Trizol 直接裂解外泌体沉淀)。 具体操作:取 200 μl 外泌体于 1.5 ml EP 管中,加入 800 μl Trizol 试剂,充分混合,裂解 10 min,12000 rpm 离心 10 min 取上清。 3)反转录 采用 Umibio 4× 预混型快速逆转录试剂盒:适用于长片段 RNA(如 mRNA、LncRNA
分析实验。 解决方案 1. 血液越新鲜越好,在血液收集管中使用 RNA 稳定试剂来保存 RNA。 2. 血液 RNA 提取本质上是白细胞 RNA 提取,使用 Ficoll-Hypaque 密度梯度离心法回收单核细胞。 3. 去除抗凝剂和酶抑制剂。 4. 可采用专门用于血液样本的 RNA 提取试剂盒(如:QIAamp RNA Blood Mini Kit,货号:52304),其中含有高效的红细胞裂解液,在有效裂解细胞的同时也能防止其中释放出的大量 RNase 对后续 RNA 提取的影响。
程度等等。 现在大部分质粒提取都用试剂盒, 根据实验需要我们可以选择不同级别的产品: 1. 从纯度上看:常规操作(如酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化),普通纯度的质粒即可;对于转染实验,则需要无内毒素质粒提取试剂盒。 2. 从提取量上看:1-20μg,小量提取试剂盒;20-40μg,中量提取试剂盒;大于40μg,大量提取试剂盒。 3. 宿主菌类别上:主要分为普通细菌质粒提取试剂盒,真菌质粒提取试剂盒,酵母菌质粒提取试剂盒。 举例:SunShinecleanTM无内毒素质粒小量抽提试剂盒采用新型
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