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质粒DNA超快速小量提取试剂盒

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品牌:简石生物

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试用份额:
30
试用说明:
1、试用品规格:5次
2、运费:包邮;多数地区包邮,具体详询
3、联系时间:试用活动结束后的 7 天内
4、申请要求:每个实验室只能申请1次
5、其他说明:写明单位/学校/课题组,提供反馈优先发货
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      简石生物

    • 规格

      5次

    使用简石生物的质粒DNA快速提取试剂盒,市场首创不需要结合液、平衡液、异丙醇等方法辅助的新型质粒提取产品,速度及操作更加便捷,碱式裂解细胞,全新的P3中和完成即可过柱收集质粒,产量与质量与市面上的热门质粒试剂盒产品具有相当竞争力,条带更加清晰,RNA残留少,能够更好的应用在后续下游应用中。全流程基本可保证在15min完成实验。
     

    产品特性

    • DNA纯度:获得的质粒产量高、纯度好,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序、转染等各种分子生物学实验。一般情况Abs260/280≥1.8,Abs260/230≥2.0,内毒素含量小于1EU/μg 。
    • 质粒DNA产量:每次可提取到约100μg,主要依据质粒的拷贝数,培养物的生长环境、细胞 OD值等因素。
    • 质粒DNA大小:最高可达25kb。
    • 洗脱体积:≥25μl。
    • 操作温度:室温(15-30°C)。
    • 操作时间:15分钟。
     
    产品亮点
    • 独有的显色反应,可以直接观察到细胞裂解中和的程度,极大地方便操作者判断其状态。
    • 快速、方便,不需要使用有毒的苯.酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好,内毒素含量极低,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序、转染等各种分子生物学实验。
    此产品仅供科研使用。
     
     
    溶液制备
    • 第一次使用时,将试剂盒中全部RNase A加入溶液P1后(终浓度100μg/ml)置于2-8℃保存。如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会有微量RNA残留,在溶液P1中补加RNase A即可。
    • 5次反应的质粒DNA洗涤液2,应添加20ml 95%的乙醇到5ml的质粒DNA洗涤液2中。100/200次反应的质粒DNA洗涤液2,应添加88ml 95%的乙醇到23ml的质粒DNA洗涤液2中,加入后请及时在方框内打钩标记,以免多次加入!
    • P3在使用前需要在冰上预先冷却。
     
    操作步骤
    1. 取1-5ml过夜培养的菌液(OD值≤5得率最.优,需满足此条件,过多菌量会导致裂解不完全,或者堵纯化柱的状况)转移到带盖收集管中全速离心力下离心30秒尽可能多地去除上清,收集菌体。
    2. 用300μl溶液P1重悬菌体沉淀,可用吸头反复吹打或涡旋振荡至彻底悬浮。(如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。)
    3. 加300μl溶液P2,温和地上下翻转数次使菌体充分裂解,至液相澄清透亮,室温放置≤5分钟。(温和地混合, 不要剧烈振荡,以免基因组DNA剪切断裂!所用时间不应超过5分钟!以免质粒受到破坏。此 时菌液应变得清亮粘稠,如果菌体少,很快清亮粘稠后就可以做下一步。 )
    4. 加500μl溶液P3,立即温和地上下翻转数次,至红色液相完全消失,变为黄色,中和完全后会出现黄色絮状沉淀。(中和完全后溶液呈现黄色,且没有形成结团的现象,中和物松散均匀)
    5. 将上述中和的裂解物在 ≥16,000 xg 的离心力下离心 5 分钟。
    6. 将步骤5中的~900μl上清转移到干净的1.5ml离心管内。(不要碰到下面的黄色沉淀)
     
    以下步骤可以通过真空负压的方式,也可以通过离心的方式进行操作(负压设备,所用真空泵及真空多联器推荐使用简石生物™技术有限公司设备产品 )
     
    负压操作步骤
    1. 将2号PX纯化柱连接到负压真空多联器上,倒入第6步的混合液,打开真空开关使液体完全通过纯化柱。
    2. 关掉真空开关,倒入800μl质粒洗涤液1到2号PX纯化柱内,打开真空开关,让液体完全通过纯化柱。
    3. 关掉真空开关,加入800μl质粒DNA洗涤液2(请先检查是否已加入乙醇!)到2号PX纯化柱内,打开真空开关让液体完全通过纯化柱。
    4. 将2号PX纯化柱套在收集管上,然后放置在台式离心机上在≥10,000xg条件下空转2分钟以去除残留乙醇。
    5. 将2号PX纯化柱套在一个干净的1.5ml离心管内,添加25μl-50μl的质粒DNA洗脱液到纯化柱基质上。(洗脱液事先在65-70℃水浴中预热,洗脱效果更好),室温放置≤5分钟,在≥10,000xg条件下离心1分钟来洗脱质粒DNA。
     
    离心操作步骤
    1. 将2号PX纯化柱套在2ml收集管上,倒入第6步的混合液,10000xg离心力下离心1分钟,去除滤出液。
    2. 加入800μl质粒DNA洗涤液1,10000xg离心力下离心1分钟,弃掉废液。
    3. 加入800μl质粒DNA洗涤液2 (先检查是否已添加乙醇) 10000xg离心力下离心1分钟,弃掉废液。
    4. 将2号PX纯化柱套在收集管上,然后放置在台式离心机上在≥10,000xg条件下空转2分钟以去除残留乙醇。
    5. 将2号PX纯化柱套在一个干净的1.5ml离心管内,添加25μl-50μl的质粒DNA洗脱液到纯化柱基质上。(洗脱液事先在65-70℃水浴中预热,洗脱效果更好),室温放置≤5分钟,在≥10,000xg条件下离心1分钟来洗脱质粒DNA。
     
     

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