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文献和实验时间,不过要注意的是纯的硝纤膜在比较脆,又容易卷,操作要小心,不适合用于需要多次重复清洗的用途--因为经不起多次“折磨”。选择硝纤膜时要注意的是选择合适的孔径,通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜,小于20KD的话建议选择0.2um的,如果小于7KD的话最好选择0.1um的膜。另外还要注意选择纯的NC膜--混有含醋酸纤维(CM)的NC膜结合力会有所降低。另外提醒一句:由于NC膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替,因此在封闭时最好使用较温和的Tween20,而且浓度不要超过0.3%(据说0.05
Western Blotting 膜法学堂:选择正确的转印膜,优化
五万二千篇国际期刊的文献使用了Immobilon-P。对于一般的化学发光的免疫检测,使用Immobilon-P 型号就可以了。 但有些特殊情况需要选择特别的转印膜。转印膜的显微结构其实是疏松多孔的材质,膜的孔径大小和膜的厚度等参数会影响不同分子量蛋白质的结合量和截留率。Immobilon-PSQ 型号的PVDF膜由于具有更均一的孔径以及更厚的横截面,因此其内表面积是其它大部分膜的3倍,再加上Immobilon-PSQ 型号的膜孔径是更小的0.2 μm,所以Immobilon
力的结合在一起,虽然这其中的机制还不是十分清楚,但由于硝酸纤维素膜(NC膜)的这个特性,而且易于封闭非特异性结合,从而得到了广泛的应用。在非离子型的去污剂作用下,结合的蛋白还可以被洗脱下来。根据被转移的蛋白分子量大小,要选择不同 孔径的硝酸纤维素膜(NC膜)。因为随着膜孔径的不断减小,膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。但是膜孔径如果小于0.1mm,蛋白的转移就很难进行了。因此,我们通 常用0.45μm和0.2μm两种规格的硝酸纤维素膜。大于20kD的蛋白就可以用0.45μm的膜,小于20kD的蛋白就要用
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