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- NEB
- M0319
- 2026年03月02日
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- 技术资料
| 品牌 | 货号 | 产品中文名称 | 产品英文名称 |
|---|---|---|---|
| NEB | M0319 | 5´ AppDNA/RNA 热稳定连接酶 | Thermostable 5´ App DNA/RNA Ligase |
| 货号 | 产品中文名称 | 产品英文名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| M0319L | 5´ App DNA/RNA 热稳定连接酶 | Thermostable 5 App DNA/RNA Ligase | 50 reactions |
| M0319S | 5´ App DNA/RNA 热稳定连接酶 | Thermostable 5 App DNA/RNA Ligase | 10 reactions |
产品特点
5´ App DNA/RNA 热稳定连接酶可将 5´ 预腺苷化且 3´-封闭的 DNA 接头连接到 RNA 和单链 DNA 的 3´-OH。
- 分离自重组来源
- 随附 10X 反应缓冲液
- 经检测不含 DNase 和 RNase
- 不确定选择哪种连接酶？ 请参阅 DNA 和 RNA 连接酶特性表
5´ AppDNA/RNA 热稳定连接酶是通过对来自嗜热自养甲烷杆菌（Methanobacterium thermoautotrophicum）（1）的 RNA 连接酶催化位点上的赖氨酸进行点突变得到的酶。该酶发挥作用不依赖 ATP，但需要 5´ 预腺苷化的接头连接到 RNA 或单链 DNA 的 3´-OH 末端。该酶也可催化 3´ 端发生 2´-O-甲基化的 RNA 和 5´ 腺苷化接头（1）的连接反应。连接反应的最佳温度范围为 60 - 65℃（2）。突变体连接酶无法使 RNA 或单链 DNA 的 5´-磷酸发生腺苷化，因此能减少不需要的连接产物（串联和环化）的形成。
该连接酶可在 65℃ 条件下反应，能减少 RNA 连接实验中 RNA 二级结构的限制。
产品来源
5´ AppDNA/RNA 热稳定连接酶是一种 His 标签融合蛋白，在大肠杆菌中表达得到。- 产品类别:
- RNA 连接,
- DNA 连接酶产品
- 应用:
- Non-Cloning Ligation
备注：以上仅为 M0319 的部分产品信息，如需NEB货号 M0319 的完整产品信息及相关的实验操作手册等等，请通过NEB官网查找对应的货号获取。
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文献和实验【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
因为看到园子中使用NEB T4 DNA连接酶的老师和同学比较多，也经常就一些连接的问题进行讨论和沟通。今天发一个关于NEB T4 DNA连接酶的一个专题，就使用过程中一些常见问题跟大家讨论一下。也希望各位老师同学能够踊跃参与，如果大家有什么疑问或者好的建议欢迎。 一、关于NEB M0202 T4 DNA 连接酶的使用方法和常见问题及解答 1、产品特性和使用方法 产品说明：该酶催化契合的双链DNA或RNA的5'-磷酸末端和3'-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑
条件下、或者pH值或温度条件改变下会发生N端自剪接,兼有蛋白酶和蛋白连接酶的特性,与内含子在RNA水平自剪接的作用方式相似. IMPACT表达的目的蛋白通过与蛋白自剪接元件intein,连接几丁质结合蛋白域(CBD)形成融合蛋白,通过几丁质柱亲和纯化融合蛋白.在特定的条件下,诱导内含肽的肽键裂解活性,将目标蛋白释放出来,而内含肽与几丁质结合蛋白仍结合在几丁质纯化介质上,达到单柱分离纯化蛋白的目的.而且,最终得到目的蛋白上不会残留多余的氨基酸. 这一系统有两个系列载体,一个是IMPACT
）有在5℃下进行切割的蛋白酶，Qiagen也有4℃下进行切割的蛋白酶，这样可以最大程度地防止蛋白降解。同时Qiagen还通过基因改造让蛋白酶也带上标签，这样一步就可以同时把蛋白酶和外源蛋白上含有的标签一并切除。现在为你介绍NEB是怎么解决这个问题的吧。利用内含肽，出除标签不留痕NEB是最早开发内含肽（intein）技术的公司。intein称为“内含肽”，在还原条件下、或者pH值或温度条件改变下会发生N端自剪接，兼有蛋白酶和蛋白连接酶的特性，与内含子在RNA水平自剪接的作用方式相似。IMPACT表达的目的
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