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- NEB
- M0569
- 2026年03月02日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
| 品牌 | 货号 | 产品中文名称 | 产品英文名称 |
|---|---|---|---|
| NEB | M0569 | 固定化 T4 DNA 连接酶 | Immobilized T4 DNA Ligase |
| 货号 | 产品中文名称 | 产品英文名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| M0569S | 固定化 T4 DNA 连接酶 | Immobilized T4 DNA Ligase | 1.1 mg |
产品特点
- 固定化 T4 DNA 连接酶（IM T4 DNA 连接酶）由 T4 DNA 连接酶与磁珠共价结合而成。
- 使用磁铁即可轻松地从反应中去除酶
- 省去了热失活步骤，避免干扰下游应用
- 固定化酶可重复使用
- 可用于新的工作流程和应用
T4 DNA 连接酶催化双链 DNA 或 RNA 中相邻的 5´ 磷酸末端和 3´ 羟基末端形成磷酸二酯键。T4 DNA 连接酶不仅能够连接平末端和粘性末端，还可以修补双链 DNA 和部分 DNA/RNA 杂交链中的单链切刻位点（1）。
固定化 T4 DNA 连接酶（又称 IM T4 DNA 连接酶）是包被有 T4 DNA 连接酶的磁珠悬浮液，以 10 mg/ml 浓度（50% 甘油）提供，每微升溶液的有效浓度为 60 粘性末端单位（CEU）。反应完成后，可借助磁力去除体系中的酶，因而酶可重复使用。
固定化 T4 DNA 连接酶在不同温度下的相对活性
|
温度 |
活性（%） |
|---|---|
|
16℃ |
100% |
|
25℃ |
100% |
|
37℃ |
50% |
固定化 T4 DNA 连接酶在不同 NEB 缓冲液中的活性
|
缓冲液 |
pH |
活性（%） |
|---|---|---|
|
NEBuffer r1.1 |
7.0 |
50% |
|
NEBuffer r2.1 |
7.9 |
100% |
|
NEBuffer r3.1 |
7.9 |
70% |
|
rCutSmart 缓冲液 |
7.9 |
100% |
|
phi29 DNA 聚合酶缓冲液 |
7.5 |
100% |
|
标准 Taq 缓冲液 |
8.3 |
70% |
|
ThermoPol 缓冲液 |
8.8 |
70% |
|
Q5 反应缓冲液 |
8.5 |
10% |
|
T4 DNA 连接酶缓冲液 |
7.5 |
100% |
|
NEBNext 快速连接缓冲液 |
7.6 |
25% |
图 1：固定化 T4 DNA 连接酶成功连接 HindIII 消化的 Lambda DNA 的产物
根据推荐方案，分别使用无连接酶、可溶性 T4 DNA 连接酶（NEB #M0202）、固定化 T4 DNA 连接酶（NEB #M0569）连接 HindIII 消化的 Lambda DNA（NEB #N3012）的产物。结果显示，可溶性酶和固定化酶的连接效果一致。
图 2：固定化 T4 DNA 连接酶可重复使用
将固定化 T4 DNA 连接酶（NEB #M0569）加入到快速连接缓冲液，对 Nanopore 接头进行连续夹板序列连接。数据显示，经过 20 次连续连接反应后，酶活性仍不受影响。
- 产品类别:
- DNA 连接酶产品
- 应用:
- Non-Cloning Ligation,
- DNA Ligation,
- Cloning Ligation
备注：以上仅为 M0569 的部分产品信息，如需NEB货号 M0569 的完整产品信息及相关的实验操作手册等等，请通过NEB官网查找对应的货号获取。
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文献和实验【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
因为看到园子中使用NEB T4 DNA连接酶的老师和同学比较多，也经常就一些连接的问题进行讨论和沟通。今天发一个关于NEB T4 DNA连接酶的一个专题，就使用过程中一些常见问题跟大家讨论一下。也希望各位老师同学能够踊跃参与，如果大家有什么疑问或者好的建议欢迎。 一、关于NEB M0202 T4 DNA 连接酶的使用方法和常见问题及解答 1、产品特性和使用方法 产品说明：该酶催化契合的双链DNA或RNA的5'-磷酸末端和3'-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑
相关专题 重组DNA技术工具酶 T4 DNA Ligase即T4 DNA连接 酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。同时T4 DNA连接酶可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合物上的单链缺刻(single-strand nicks)。
1X反应缓冲液成分: 50mMTris-HCl 10mMMgCl2 1mMATP 10mMDithiothreitol pH7.5@25°C 酶活定义: Oneunitisdefinedastheamountofenzymerequiredtogive50%ligationofHindIIIfragmentsofλDNA(5′
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