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北京百泰派克生物科技有限公司
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简述膜蛋白的类型及特点是什么
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膜蛋白的类型及特点
膜蛋白是生物膜的重要组成部分,广泛存在于细胞膜、细胞器膜等生物膜系统中,承担着物质运输、信号转导、能量转换等关键生物学功能。根据其与膜的结合方式及结构特征,膜蛋白主要分为整合膜蛋白(内在膜蛋白)和外周膜蛋白(外在膜蛋白)两大类,此外还包括脂锚定膜蛋白等特殊类型。整合膜蛋白通过疏水跨膜结构域嵌入脂双层中,部分或wánquán贯穿膜结构,例如G蛋白偶联受体(GPCRs)和离子通道蛋白;外周膜蛋白则通过静电作用或氢键与膜表面结合,不嵌入脂双层,如细胞色素c;脂锚定膜蛋白通过共价连接的脂质分子(如糖基磷脂酰肌醇,GPI)锚定在膜上,如碱性磷酸酶。
膜蛋白的特点主要体现在其结构多样性和功能复杂性上。首先,整合膜蛋白的跨膜区通常由α-螺旋或β-桶状结构组成,以适应疏水环境;其次,膜蛋白的构象动态变化对其功能至关重要,例如GPCRs通过构象变化传递信号;此外,膜蛋白的寡聚化现象普遍存在,如受体làoānsuān激酶(RTKs)通过二聚化激活下游通路。研究膜蛋白的技术包括X射线晶体学、冷冻电镜(cryo-EM)和核磁共振(NMR),具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定。
膜蛋白的分离和纯化是研究难点,需使用去垢剂(如Triton X-100、DDM)维持其天然构象。近年来,纳米盘技术和类膜环境模拟技术的发展为膜蛋白研究提供了新思路。此外,膜蛋白的翻译后修饰(如糖基化、磷酸化)对其功能调控具有重要意义,例如EGFR的磷酸化修饰影响其信号传导活性。
常见问题:
Q1. 为什么某些膜蛋白难以通过X射线晶体学解析结构?
A:膜蛋白的疏水跨膜区使其在非天然环境中易聚集或失活,且难以形成高质量晶体。此外,去垢剂的使用可能干扰蛋白的天然构象,增加结晶难度。冷冻电镜技术的进步部分解决了这一问题。
Q2. 脂锚定膜蛋白与整合膜蛋白在功能上有何差异?
A:脂锚定膜蛋白通常参与细胞表面信号接收或酶活性调节,其脂质锚定使其在膜平面上具有较高流动性,但缺乏跨膜信号传导能力;而整合膜蛋白(如离子通道)可直接介导跨膜物质运输或信号传递。
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文献和实验1. 去垢剂类型和特点表 常用的去垢剂大概有十几种,根据膜蛋白分子量可选用下面两根预装柱进行快速筛选: 表 2. 用两根预装柱快速筛选去垢剂结果表 运行流速设为 0.5 mL/min,15 min 以内就可以筛选一个去垢剂,而且上样量 5-50μL,可节省样品。 标签 摸索得到合适的去垢剂之后,就可以进行常规的层析实验。 增溶之后,高速离心取上清过亲和层析柱,为了减少后续的处理步骤,往往设计较小的标签,一般使用 HIS 或者 Strep,如果使用 GST 标签,则需要引入酶切位点。 标签
膜蛋白依附或横跨在细胞膜的磷脂双分子层上,使膜蛋白的表达、纯化、结晶和结构分析都有很大难度。由于非常难以获得高纯度的膜蛋白,进而解析它们的结构和功能,使根据膜蛋白结构设计药物的方法难以施展,而这种方法是目前开发药物最有效的方法之一,因为药物要能有效治疗并且使副作用最小化,作用位点就必须精准。很多科研人员想深入研究膜蛋白,希望攻克困扰人类的各种疾病,但由于提取高纯度目标膜蛋白并不便捷,从而影响研发进度。目前市面上有一些专用于膜蛋白提取的试剂盒,大多数只能提取某几种类型的膜蛋白, 有些试剂盒只能提取膜
、SmIgM C、IL-R D、CD4 3.兄弟姐妹间进行器官移植的排斥反应是: A、异种抗原 B、自身抗原 C、同种异型抗原 D、手术时细菌感染 4.参与免疫应答的细胞都有: A、抗原受体 B、SRBC受体 C、有丝分裂原受体 D、MHC的编码产物 四、问答题(每小题10分,共30分) 1.免疫功能有几种?简述其正常功能是什么。 2.简述抗原—抗体反应的基本特点。 3.何谓肿瘤免疫逃逸现象?简述其可能的机理。 2001年中国药品生物制品检定所硕士
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