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北京诺禾致源科技股份有限公司
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蛋白组测序
诺禾致源蛋白组学研究
定性蛋白质组
蛋白质相互作用鉴定
通过液质联用技术(LC-MS/MS)对IP、Co-IP、Pull-down等纯化样本中的蛋白混合物进行鉴定， 可同时鉴定目的蛋白及其相互作用蛋白,从而构建与目的蛋白的蛋白质相互作用谱。
蛋白质组全谱鉴定
蛋白质组全谱鉴定是指蛋白质组分分析,是以完整的组织、血液或体液等复杂样本为研究对象, 目的在于识别出样品中尽可能多的肽段和蛋白质。基于质谱技术的全谱分析, 可为蛋白高通量的定量和修饰分析提供参考信息。
修饰定性蛋白质组
通过SDS-PAGE和液质联用技术(LC-MS/MS)对IP所得蛋白上的修饰位点进行鉴定, 可以对目前所有已知的修饰类型及一些特殊的小分子药物在蛋白上的修饰位点进行鉴定。
技术参数
| 产品类型 | 仪器平台 | 项目周期 | |
|---|---|---|---|
| 定性蛋白质组 | 焦点胶条鉴定 | Thermo Q ExactiveTM HF-X | 20个自然日 |
| 组织、溶液等蛋白鉴定 | 40个自然日 | ||
信息分析流程
基于质谱检测得到的Raw文件,进行对应数据库的搜索,然后基于数据库搜索的结果进行蛋白质鉴 定,同时进行肽段、蛋白和母离子质量容差分布分析,来评定质谱检测数据的质量。然后对鉴定到的 蛋白进行常见功能数据库注释,包括COG、GO和KEGG数据库。信息分析流程如下图：
iTRAQ/ TMT定量蛋白质组
iTRAQ和TMT是分别由美国AB Sciex公司和Thermo公司研发的多肽体外标记定量技术, 采用8种或18种同位素标签,通过特异性标记多肽的氨基酸基团, 一次上机可实现8种或18种不同样本中蛋白质的相对定量,是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术。
技术原理
iTRAQ和TMT原理类似,以TMT试剂为例,该试剂结构由报告基团、中性平衡基团和反应基团三部分组成。
不同报告基团及其相对应平衡基团的质量和都相同,而反应基团能与赖氨酸ε氨基和所有肽链的氨基末端连接,可标记所有氨基酸。
不同标记试剂与来源于不同样品胰酶消化后的肽段结合,经过色谱分离,并通过一级质谱和二级质谱。
平衡基团在二级质谱时发生中性丢失,而报告基团在二级质谱低质量区域产生多个报告离子,其信号强度分别代表该标记样品的表达量, 根据报告离子的峰面积计算同一蛋白质同一肽段在不同样品间的比值,从而实现蛋白的相对定量。
技术特征
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1. 通量高,不受样本数目的限制
单次上机最多可以同时进行8个样品(iTRAQ)或18个样品(TMT)蛋白的鉴定和定量, 超过8个样品(iTRAQ)或18个样品(TMT)可以通过设置内参,形成搭桥,实现多次上机数据之间的比较,不受样本数目的限制。 -
2. 定量准确,重复性高
不同样本标记之后混样,统一处理、上机,与非标记定量样本单独处理、上机相比, 减少了样本处理和上机造成的实验误差,提高了定量的准确性和重复性。 -
3. 蛋白检测范围广
无物种特异性限制,理论上可用于所有物种。蛋白范围广,胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白、分泌蛋白等皆可检测。 蛋白丰度和分子质量跨度大,可检测出低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。
技术路线
信息分析流程
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文献和实验蛋白质组作为重要的科研技术，广泛应用于科研中，在每年数万篇论文中发挥重要作用。如何利用组学工具快速切入临床科学问题形成科研思路，为我们的研究提速？可参考以下三种研究思路： 6.1、IF 1-3 分文章：蛋白质组学+差异蛋白 蛋白质组学检测 筛选差异蛋白进行表达量验证 分析差异蛋白，对差异蛋白进行 GO 和 KEGG 分析 6.1.1、案例一，影响因子 IF=2.2 iTRAQ-based quantitative proteomics analysis of immune
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University, Research Dr., C118 LSRC, Durham, NC 27710. Phone: (919) 613-8606. Fax: (919) 668-0977. E-mail: hayst001@mc.duke.edu . REFERENCES 蛋白质组相关设备及试剂: 液相HPLC系统 | 毛细管LC系统 | 气相色谱系统 | 自动固相萃取系统 | 联用色谱系统 | 更多... (a) Triple quadrupole. Triple
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