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外泌体是蛋白质吗为什么
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外泌体是dànbáizhì吗为什么
外泌体(exosomes)并非单纯的dànbáizhì,而是直径30-150纳米的细胞外囊泡,其本质是由脂质双层膜包裹的纳米级结构。虽然dànbáizhì是外泌体的重要组成成分(约占其总质量的40-60%),但外泌体还包含核酸(如mRNA、miRNA)、脂质和代谢产物等多种生物分子。这个问题的核心在于理解外泌体的结构特性:其膜结构来源于细胞内膜系统,内部腔体携带的dànbáizhì既有膜结合蛋白也有可溶性蛋白,这些dànbáizhì通过特定的分选机制被选择性包裹。外泌体的dànbáizhì组成具有高度异质性,目前已鉴定出超过9,000种dànbáizhì,包括四跨膜蛋白家族(CD9、CD63、CD81)、热休克蛋白、膜转运蛋白等特征性标志物。这些dànbáizhì不仅构成外泌体的结构框架,更参与细胞间通讯、免疫调节等重要生物学过程。值得注意的是,外泌体dànbáizhì组的特异性与其来源细胞类型和生理状态密切相关,这使得"外泌体是dànbáizhì吗为什么"的探讨必须建立在对其多组分特性的全面认识基础上。从生物发生机制来看,外泌体通过多泡体(MVB)与质膜融合释放,这一过程涉及ESCRT复合物等dànbáizhì机器的精密调控,进一步说明dànbáizhì在外泌体形成中的关键作用,但并不能将外泌体简单等同于dànbáizhì集合体。
外泌体的分离纯化技术如差速超速离心、尺寸排阻色谱等,都需要考虑其dànbáizhì与其他组分的平衡。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定,但技术核心在于保持外泌体结构的完整性。超速离心法通过梯度密度分离可获取高纯度外泌体,而商业化的试剂盒则多利用抗体偶联磁珠特异性捕获表面标志蛋白(如CD63)。这些方法都反映出外泌体研究中dànbáizhì既是研究对象又是分离工具的双重属性。
在功能研究层面,外泌体dànbáizhì的异质性解释了其多样的生物学效应。例如,肿瘤来源外泌体携带的PD-L1蛋白可抑制T细胞活性,而间充质干细胞外泌体的HSP70蛋白则促进组织修复。这种功能多样性正是回答"外泌体是dànbáizhì吗为什么"时需要强调的:虽然dànbáizhì赋予外泌体特定功能,但其作用依赖于完整的囊泡结构及与其他组分的协同。近年单外泌体蛋白zhìzǔxué技术的发展,使研究者能在单个囊泡水平解析dànbáizhì组成,为理解外泌体异质性提供了新视角。
外泌体dànbáizhì的定量分析常采用质谱或免疫印迹等方法。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定,但技术选择需考虑目标蛋白的丰度和特异性。如采用SIMOA数字ELISA可检测低至fg/mL的外泌体标志蛋白,而质谱非biāojìdìng量(LFQ)则适合全局dànbáizhì组分析。这些技术揭示外泌体dànbáizhì的动态变化,为疾病诊断提供潜在标志物。
常见问题:
Q1. 外泌体dànbáizhì组与来源细胞dànbáizhì组有何本质差异?
A:外泌体dànbáizhì组通过ESCRT依赖/非依赖机制选择性富集,其与母细胞dànbáizhì组的相关系数通常仅为0.3-0.5。跨膜蛋白(如CD家族)在外泌体膜上的富集度可达细胞膜的10-100倍,而核蛋白等则被显著排除,这种差异由Rab GTP酶调控的dànbáizhì分选机制决定。
Q2. 如何解释不同研究中报道的外泌体dànbáizhì含量存在数量级差异?
A:这种差异主要源于:①分离方法差异(超速离心vs聚合物沉淀)导致的外泌体纯度不同;②质谱检测灵敏度与深度差异(DDA vs DIA模式);③dànbáizhì提取效率差异(RIPA vs SDS等裂解液)。建议参照MISEV2018指南使用跨方法验证的标志蛋白进行标准化。
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文献和实验注:如同时要求外泌体抽提、鉴定及蛋白质组学,请将样本要求量进行加和。 备注:请明确提供的样本体积。细胞上清及尿液,超过 50ml,每 50mL 算作一个 1 个样本,以此计算样本数,核算抽提周期。血清、血浆、关节液、脑脊液进行超速离心,每 5mL 算作 1 个样本,以此计算样本数,核算抽提周期。
外泌体(Exosomes)作为当前科研界的热度话题,很多人觉得它很神秘,不知道它在疾病治疗或发生、发展中扮演什么样的角色,今天我们跟大家一起基于文献来探讨一下外泌体具有的功能。 先回顾一下外泌体的基础知识。外泌体是细胞分泌到胞外的一种囊泡(Extracellular Vesicles,EVs),其大小为 30-150 nm,具有双层膜结构和茶托状形态,含有丰富的内含物(包括核酸、蛋白和脂质等),参与细胞间的分子传递。 所有的细胞都能分泌外泌体,但是不同细胞分泌的外泌体不管在数量
细胞上清外泌体细胞上清外泌体提取图解过程 1.核对样本 2.离心,3000g,15min; 3.离心后样本(有略微沉淀) 4.将样本转移至新的 50ml 管并加 ECS 试剂; ECS 与试剂有明显分层; 震荡混匀; 5.在 4 度冰箱静置 2H 以上,离心 10000g,60min; 6.离心后的样本(沉淀明显,沉淀中富含外泌体) 将上清吸出留下沉淀,将离心管倒扣于纸上自然晾干残留的上清液; 7.加 PBS 重悬沉淀; 用 PBS 洗脱后的沉淀 8.离心进一步去除
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