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- 江苏省启东市
- 2025年07月30日
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- 提供商：
芳景生物
- 服务名称：
GAL4-UAS转基因
GAL4-UAS转基因
利用attP-PhiC31转基因技术，把外源物种目标基因转入黑腹果蝇基因组，通过GAL4-UAS二元调控系统，让基因在果蝇体内高量表达并进行表型研究。这样，即可利用黑腹果蝇的科研优势，将非模式物种基因功能研究简单化、成熟化和标准化。
全身温控过表达解决方案：
◉技术难题：当GAL4由全身表达的强启动子驱动时，UAS下游的外源基因会在黑腹果蝇绝大部分细胞过量表达，进而可能产生毒性，导致果蝇生存能力下降甚至死亡。
◉解决方案：芳景生物制作并提供了Tubp-GAL4,Tubp-GAL80ts果蝇品系，通过饲养温度变化控制外源基因表达量，保证在低温时，转基因果蝇可以顺利生存和扩增，同时也保证高温热激之后，目的外源基因进行过量表达。
其他GAL4-UAS品系构建：
除Tubp-GAL4,Tubp-GAL80ts品系外，芳景生物还可提供多种GAL4驱动品系，并负责与UAS转基因品系构建成稳定遗传品系，实现外源基因在果蝇中的时空特异性稳定表达。
| attP-PhiC31定点插入(GAL4-UAS过表达果蝇品系构建) | ||
| 实验步骤 | 内容 | 周期(周) |
| 注射样品制备 | 1.Donor载体构建：无缝克隆连接 载体：包含attB位点 + UAS + miniWhite marker 片段：包括质粒亚克隆，cDNA克隆，基因合成等方式 2.Donor质粒去内毒素提取 |
1~4 |
| 显微注射 | 1.注射品系：attP果蝇品系(PhiC31内源表达) 2号染色体：attP40、attP5 3号染色体：attP2、VK00005 2.注射样品：donor质粒 3.注射胚胎数量：200-300个 |
2 |
| 杂交和筛选 | 1.P0果蝇与平衡子杂交 2.筛选F1阳性果蝇(红眼) |
2 |
| 分子鉴定 | 1.插入目的序列鉴定 2.插入基因组位置鉴定 |
0 |
| 构建UAS和UAS+GAL4稳定遗传品系 | 1.F1阳性果蝇杂交双染色体平衡子 2.构建UAS稳定/纯合品系 3.F2果蝇与GAL4驱动品系杂交【1】 4.构建2,3号染色体双平衡的UAS+GAL4稳定/纯合品系【2】 |
8~10 |
| 合计 | 13~18 | |
| attP-PhiC31定点插入(GAL4-UAS全身温控过表达果蝇品系构建) | ||
| 实验步骤 | 内容 | 周期(周) |
| 注射样品制备 | 1.Donor载体构建：无缝克隆连接 载体：包含attB位点 + UAS + miniWhite marker 片段：包括质粒亚克隆，cDNA克隆，基因合成等方式 2.Donor质粒去内毒素提取 |
1~4 |
| 显微注射 | 1.注射品系：attP40或attP5果蝇品系(PhiC31内源表达) 2.注射样品：donor质粒 3.注射胚胎数量：200-300个 |
2 |
| 杂交和筛选 | 1.P0果蝇与平衡子杂交 2.筛选F1阳性果蝇(红眼) |
2 |
| 分子鉴定 | 1.插入目的序列鉴定 2.插入基因组位置鉴定 |
0 |
| 构建UAS和UAS+GAL4稳定遗传品系 | 1.F1阳性果蝇杂交双染色体平衡子 2.构建UAS稳定/纯合品系 3.F2果蝇与Sp/CyO;Tubp-GAL4,Tubp-GAL80ts驱动品系杂交 4.构建2,3号染色体双平衡的UAS;GAL4,GAL80ts稳定/纯合品系【1】 |
8~10 |
| 合计 | 13~18 | |
| attP-PhiC31定点插入(GAL4-RNAi基因敲低果蝇品系构建) | ||
| 实验步骤 | 内容 | 周期(周) |
| 注射样品制备 | 1.Donor载体构建：无缝克隆连接 载体：包含attB位点 + UAS + miniWhite marker 片段：21bp shRNA反向互补长片段【1】 2.Donor质粒去内毒素提取 |
1~4 |
| 显微注射 | 1.注射品系：attP果蝇品系(PhiC31内源表达) 2号染色体：attP40、attP5 3号染色体：attP2、VK00005 2.注射样品：donor质粒 3.注射胚胎数量：200-300个 |
2 |
| 杂交和筛选 | 1.P0果蝇与平衡子杂交 2.筛选F1阳性果蝇(红眼) |
2 |
| 分子鉴定 | 1.插入目的序列鉴定 2.插入基因组位置鉴定 |
0 |
| 构建UAS和UAS+GAL4稳定遗传品系 | 1.F1阳性果蝇杂交双染色体平衡子 2.构建UAS稳定/纯合品系 3.F2果蝇与GAL4驱动品系杂交【2】 4.构建2,3号染色体双平衡的UAS+GAL4稳定/纯合品系【3】 |
8~10 |
| 合计 | 13~18 | |
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文献和实验GAL4/UAS Targeted Gene Expression for Studying Drosophila Hedgehog Signaling
The GAL4/upstream activating sequence (UAS) system is one of the most powerful tools for targeted gene expression. It is based on the properties of the yeast GAL4 transcription factor which activates transcription of its target genes
tianjiaoya 小弟最近要构建一个质粒，需要用到Gal4转录因子，有哪位大侠知道Gal4的UAS在那个质粒上？最好是容易买到的质粒啊，我查了好多质粒，都很难买到。或者能把Gal4的UAS的序列告诉我，这个上游激活序列应该不大，我可以去直接人工合成，然后参照别人那些构建成功的质粒的样子，把UAS插入到我的质粒中去，谢谢各位大侠了！！！ song333 GAL4/UAS system The GAL4
表达的调控，单单靠GLA4不知道能不能起到调控蛋白表达的目的？有这方面的文献吗？先谢谢各位大侠的帮助了！！！！ shilei5794749 类似GAL4-UAS系统，楼主可以借鉴这个系统。GLA4可以用pGBKT7或者pBIND上的，做成删除NLS序列的GAL4(BD+AD)或者GAL4BD-VP16。此质粒还可融合你要研究的蛋白，上游可以加调控元件。 另一个质粒用UAS序列打头，后置报告基因就行啦！ 版主dnazyme留言:
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