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- 江苏省启东市
- 转基因果蝇
- 2025年07月29日
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果蝇转基因技术服务
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芳景生物
果蝇中的PhiC31整合系统由3部分构成：(1) PhiC31整合酶；(2) attP果蝇品系；(3) 带有attB序列的注射质粒。PhiC31整合酶可通过注射外源PhiC31整合酶mRNA来提供，或者通过转基因将整合酶基因整合到果蝇基因组上，从而让胚胎自身表达提供整合酶。attP果蝇品系是通过转座子转基因技术（比如P因子， piggyBac， Mariner转座子），构建的带有attP位点的果蝇品系。attB质粒除了含attB位点，还被克隆上去了需要整合到基因组上的目的片段。这样，在PhiC31整合酶的催化下，注射质粒上的attB位点与基因组上的attP位点之间发生重组，从而将质粒上的序列完全整合到基因组上，并在序列两端形成新的杂合位点attL和attR，但attL与attR不能介导新的重组，因此PhiC31介导的转基因过程是不可逆的。
多样化的attP果蝇品系：芳景提供多种有效的attP果蝇品系，涵盖X染色体和2号、3号染色体上的多个位点，便于进行基因重组。
◉推荐常用attP品系：attP40(II,25C6)，attP2(III,68A4)，效率高并且经过实验验证，被证明不影响插入位点附近的基因功能，且插入序列表型稳定。
◉推荐重组用attP品系：attP5(II,50F1)，VK00005(III,75A10)，适用于分别同attP40和attP2的定点插入品系进行重组构建，从而进行更复杂的课题研究。
广泛的科研应用场景：◉外源序列转入：可实现从简单到复杂序列的转入，一般推荐载体总长度小于15kb。
◉内、外源基因过表达：提供5~20×UAS，实现不同程度的基因过表达；提供多种泛表达和组织特异性表达的GAL4品系。
◉RNA干扰：单个shRNA针对单基因干扰研究多个shRNA串联，对多个基因进行共同干扰研究
◉基因调控研究定制化服务：除了GAL4-UAS系统，芳景生物也拥有其他多种基因调控研究的经验和方案可供选择，如：
- 生殖系统表达：UASp-K10；
- 二元调控系统备选方案：lexA-lexAop，QF-QUAS-QS；
- 诱导启动或抑制表达：GeneSwitch，GAL80；
- Split-GAL4：p65AD，GAL4DBD；
- 增强子表达模式研究：GMR-FlyLight，VT系列等。
如果客户希望将目的片段整合到特定的attP品系，可以将果蝇寄给我们进行扩增然后进行注射。另外，我们免费提供balancer杂交及鉴定服务（我们有FM7a，Bc/Cyo，TM3/TM6b等balancer品系），如果客户需要与指定的品系进行杂交，可提前将果蝇寄给我们进行扩增。
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文献和实验、lactococcal噬菌体的TP901―1整合酶、放线菌噬菌体的R4整合酶等。中C31整合酶(φC31―int)能够有效介导噬菌体基因组中attP位点与细菌宿主染色体上attB位点间的重组反应，将外源基因整合到基因组中，使转基因的持续、高效表达，为非病毒载体转移系统在遗传病基因治疗的应用开辟了新的途径。
性酶切。 除了制备插入片段，PCR 也是一种在在克隆后筛选克隆是否携带目标插入片段的有效方法。引物经过设计，可以用于确定载体中插入片段是否存在和插入方向。 4.突变 PCR 克隆的一大优点是能够通过克隆将所需突变引入目的基因中，以便进行突变研究。在定点突变中，经过设计的 PCR 引物可将碱基置换、删除或插入整合到特定序列中。如图 5所示，引物定位到已克隆至质粒中的序列上。随后，含有引入突变的 PCR 产物通过自我连接，重新生成环状质粒，并用于转化感受态细胞。 图 5.PCR 用于定点突变。该方法使用非重叠
Gateway也可以被视为一种克隆操作平台：把目的基因克隆到入门载体（Entry Vector）后，就不用依赖限制性内切酶，而靠载体上存在的特定重组位点和重组酶，高效、快速地将目的基因克隆到其它的受体载体（Destination Vector，目的载体）上。Gateway的原理也是建立在噬菌体DNA定点整合到细菌宿主基因组上。在噬菌体和细菌的整合因子（INF、Int）的作用下，lambda的attP位点和大肠杆菌基因组的attB位点可以发生定点重组，lambda噬菌体DNA整合到大肠杆菌的基因
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