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- 北京市昌平区
- 转基因果蝇
- 2025年07月30日
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- 服务名称：
果蝇转基因服务
- 提供商：
芳景生物
P因子是在果蝇基因组上发现的一类转座子，分自主（autonomous）和非自主（non-autonomous）两种类型。自主P因子自身能够编码转座酶（transposase），介导P因子的转座；非自主P因子则依赖外源的转座酶来进行转座。野生型的自主P因子长2.9kb，5‘和3’末端含31bp的倒置重复序列，中间编码含4个ORF的转座酶基因，重复序列和转座酶是发生转座必不可少的元件。
表达转座酶。我们可以根据客户的选择，共注射helper plasmid或者注射Δ2-3 strain（BDSC# 1610，BDSC# 2078）。
| 转座酶随机插入 | ||
| 实验步骤 | 内容 | 周期(周) |
| 注射样品制备 | 1.Donor载体构建：无缝克隆连接 载体：包含piggybac转座子 + miniWhite marker 片段：包括质粒亚克隆，基因组DNA克隆，cDNA克隆等方式 2.Donor质粒去内毒素提取 |
1~4 |
| 显微注射 | 1.注射品系：w1118(或客户指定品系) 2.注射样品：donor质粒 + piggbac转座酶helper质粒 3.注射胚胎数量：500-600个 |
2 |
| 杂交和筛选 | 1.P0果蝇与平衡子杂交 2.筛选F1阳性果蝇(红眼) |
2 |
| 分子鉴定 | 1.插入目的序列鉴定 2.插入基因组位置鉴定 |
0 |
| 构建稳定品系 | 1.F1阳性果蝇杂交双染色体平衡子，确定插入染色体 2.构建稳定/纯合品系 |
6~10 |
| 合计 | 11~18 |
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文献和实验方法： 图 1. CKO 正确重组双臂 PCR 鉴定示意图 如图 1 所示，F1 与 R2 为目的位点臂外引物，只有 Donor 正确重组入靶位点，双臂 PCR（5’arm 和 3’arm）才能扩增出预期条带，进而判断模型为正确重组模型。 TIPS 由于 KO（基因敲除）或 TG（转基因）小鼠模型鉴定较为简单，本文只讨论模型制作时带有重组 Donor 的小鼠模型的鉴定方法。 但双臂 PCR 鉴定存在一定的缺陷： 无法鉴定模型是否有随机插入。F1 与 R2为目的位点臂外引物，无法鉴定出未在目的
的进入而突然生成了转座酶，结果使很多的P因子发生转座，造成插入突变。这样杂交生下的子代出现染色体畸变和生育力下降。可是，M品系雄果蝇和M品系雌果蝇杂交，或者P品系的雌雄果蝇杂交，都不会出现这种生育障碍。其原因是雌果蝇基因组中完整的全长P因子不能激活缺失型P因子的转座。这表明细胞质对P因子的转座也有重要作用，细胞质起这种作用的称为细胞型(cytotype)。含P因子的P品系即为P细胞型，不含P因子的M品系为M细胞型。只有当含p因子的染色体出现在M细胞型中时，才会使杂种子代出现杂种发育障碍。目前认为
中存在转座子（如P因子）后，通过利用独特的Ｐ因子插入诱变法，实现了大规模诱发单基因突变并进行基因功能研究。 Ｐ因子是果蝇中的一种自主转座因子，由转座基因和转座酶两个基因组成。当转座基因和转座酶基因两者都存在时，Ｐ因子转座，从而引起插入位点及其附近的基因产生突变；但如果转座酶基因缺失，转座便不能发生。根据上述理论依据，因此只要建立两个品系，其中一个含有正常的转座基因，而转座酶基因异常；另一个含有正常的转座酶基因，而转座基因异常，则在该品系内，转座便不能发生。但若让两个品系杂交，则F1
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