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- 北京市昌平区
- 转基因果蝇
- 2025年07月30日
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- 服务名称：
果蝇转基因服务
- 提供商：
芳景生物
P因子随机插入转基因
P因子转基因技术最早由Rubin和Spradling于1982年开发出来，他们将带有正常rosy基因的P因子载体，注射到rosy突变体果蝇（眼色为棕色）的胚胎后，能够从后代中筛选到rosy基因功能恢复的果蝇（眼色正常），证明正常rosy基因被整合到了突变体果蝇的基因组上。自此，P因子转基因技术成为重要的研究工具。P因子转基因起初主要应用于构建果蝇突变体，后来生物学家根据需要又对P因子进行了修饰和改造，进一步开发出表型resuce、enhancer trapping、gene trapping、RNAi、辅助FLP/FRT系统、gene targeting等多种应用，P因子转基因技术已成为果蝇基因研究不可或缺的重要技术。
P因子是在果蝇基因组上发现的一类转座子，分自主（autonomous）和非自主（non-autonomous）两种类型。自主P因子自身能够编码转座酶（transposase），介导P因子的转座；非自主P因子则依赖外源的转座酶来进行转座。野生型的自主P因子长2.9kb，5‘和3’末端含31bp的倒置重复序列，中间编码含4个ORF的转座酶基因，重复序列和转座酶是发生转座必不可少的元件。
P因子是在果蝇基因组上发现的一类转座子，分自主（autonomous）和非自主（non-autonomous）两种类型。自主P因子自身能够编码转座酶（transposase），介导P因子的转座；非自主P因子则依赖外源的转座酶来进行转座。野生型的自主P因子长2.9kb，5‘和3’末端含31bp的倒置重复序列，中间编码含4个ORF的转座酶基因，重复序列和转座酶是发生转座必不可少的元件。
一般的P因子转基因，都是通过向胚胎注射带有外源目的片段的非自主型P因子，这就需要外源提供转座酶。外源转座酶有通常两种提供形式：通过共注射转座酶辅助质粒（Δ2-3 transposase helper plasmid）（如图2），或者胚胎自身
表达转座酶。我们可以根据客户的选择，共注射helper plasmid或者注射Δ2-3 strain（BDSC# 1610，BDSC# 2078）。
表达转座酶。我们可以根据客户的选择，共注射helper plasmid或者注射Δ2-3 strain（BDSC# 1610，BDSC# 2078）。
| 转座酶随机插入 | ||
| 实验步骤 | 内容 | 周期(周) |
| 注射样品制备 | 1.Donor载体构建：无缝克隆连接 载体：包含piggybac转座子 + miniWhite marker 片段：包括质粒亚克隆，基因组DNA克隆，cDNA克隆等方式 2.Donor质粒去内毒素提取 |
1~4 |
| 显微注射 | 1.注射品系：w1118(或客户指定品系) 2.注射样品：donor质粒 + piggbac转座酶helper质粒 3.注射胚胎数量：500-600个 |
2 |
| 杂交和筛选 | 1.P0果蝇与平衡子杂交 2.筛选F1阳性果蝇(红眼) |
2 |
| 分子鉴定 | 1.插入目的序列鉴定 2.插入基因组位置鉴定 |
0 |
| 构建稳定品系 | 1.F1阳性果蝇杂交双染色体平衡子，确定插入染色体 2.构建稳定/纯合品系 |
6~10 |
| 合计 | 11~18 |
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