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- 酶联免疫斑点检测
- 上海
- 2026年01月04日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称：
酶联免疫斑点检测
一、技术原理
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核心机制：
- 采用双抗体夹心法。首先在微孔板（如PVDF膜或硝酸纤维素膜）上包被捕获抗体，加入待测细胞（如淋巴细胞）和刺激物（如抗原）。若细胞分泌目标蛋白（如IFN-γ），会被膜上抗体捕获。
- 洗脱细胞后，加入酶标记的检测抗体及显色底物，在分泌部位形成有色斑点。每个斑点代表一个活性分泌细胞。
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定量方式：
- 斑点数量反映分泌细胞的数量，斑点大小指示分泌水平。可通过显微镜人工计数或专用分析仪自动分析。
二、技术优势
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超高灵敏度：
- 可检测百万分之一（10⁻⁶）的阳性细胞，灵敏度比ELISA高2-3个数量级。
- 仅需少量样本（如45ml血液可测600种抗原）。
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单细胞分辨率：
- 直接反映单个细胞功能，而非群体平均值，避免假阴性。
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功能活性检测：
- 仅检测活细胞的实时分泌能力，冻存细胞复苏后仍适用。
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高通量与便捷性：
- 支持96孔板或384孔板，可同时处理数百样本，操作标准化。
- 支持96孔板或384孔板，可同时处理数百样本，操作标准化。
三、应用领域
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临床诊断：
- 结核病诊断（如FDA批准的T-SPOT.TB试剂盒）、寄生虫病免疫评估。
- 辅助性T细胞活性检测（如IFN-γ分泌）。
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疫苗与药物研发：
- 评价疫苗诱导的细胞免疫，中国药监局将其列为疫苗有效性标准方法。
- 基因治疗毒性评估。
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基础研究：
- T/B细胞功能分析、感染性疾病、自身免疫病及肿瘤免疫研究。
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文献和实验ELISPOT检测? 答:酶联免疫斑点 ( enzyme-linked immunosorbent spot, ELISPOT) 检测技术是通过两种高亲和力的特异性抗细胞因子抗体来检测淋巴细胞分泌细胞因子情况的一种方法。 淋巴细胞在体内被抗原激活后，或者在体外培养中被培养液中含有的特异性抗原或刺激剂激活后，将这些细胞转入ELISPOT培养板中。这些活化的淋巴细胞所分泌的细胞因子，在孵育的过程中可在分泌细胞原位被ELISPOT培养板上包被的特异
IFN-γ（干扰素-γ）主要产生于激活的T细胞和NK细胞。TH1型响应的特点是通过辅助T细胞和细胞毒T细胞产生IFN-γ，所以高水平IFN-γ的产生是由于寄主应对细胞内的病原体产生了有效的防御。酶联免疫斑点法通常用于评估抗原特异的T细胞的功效，即检测IFN-γ的释放。酶联免疫斑点法是一种非常灵敏的免疫检测方法，它可以在单细胞水平检测细胞因子的分泌。酶联免疫斑点法是最灵敏的细胞检测方法之一，它检测的灵敏度可以达到1：100 000个细胞。依赖于化学物质的分析，酶联免疫斑点分析可以比传统
随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用，使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法（ELISA）检测体液中游离的细胞因子（CK）或抗体，但由于游离的循环抗体或CK的半哀期不同，使之在体液中不断的被代谢或与靶器官结合，而不能确切的反映体内的抗体及CK的水平。80年代，国外的科研工作者根据ELISA技术的基本原理，建立了体外检测特异性抗体分泌细胞和CK分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术（ELISPOT）。因其具有较高
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