实时PCR实验

实时PCR实验（real-time PCR），属于定量PCR（Q-PCR）的一种，以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。定量方式包括绝对定量和相对定量。可检测mRNA，microRNA，lncRNA和DNA水平的基因拷贝数变化。

实时PCR实验具体方法

1.SYBRGreen法：

在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

SYBR定量PCR扩增荧光曲线图

PCR产物熔解曲线图（单一峰图表明PCR扩增产物的单一性）

2.TaqMan探针法：

探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。

二、服务流程

1、引物设计与合成
2、DNA/RNA抽提
3、反转录（针对RNA）
4、上机定量分析
三、客户提供
1、全血、组织或细胞。
2、引物，或由丰核提供。
3、基因信息：目的基因名称、物种和序列（或GenBank Accession Number）。
四、交付内容
实验报告：详细操作步骤
原始数据：溶解曲线图，扩增曲线图，ct值

实时PCR实验服务列表

项目	备注	周期
引物设计与合成		3个工作日
提取	RNA提取、miRNA提取、DNA提取	2个工作日
反转录		2个工作日
qPCR反应	SYBR Green方法，相对定量	2个工作日