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β-半乳糖苷酶染色细胞衰老是细胞在正常环境条件下发生的功能减退、逐渐趋向死亡的现象。衰老的细胞虽然生长发生不可逆性停滞，不能进入S期，但仍具有代谢功能，而且比年轻细胞的抗凋亡能力强，可以继续生存。其特征是细胞体积变大，呈扁平状；细胞核变大，核膜内陷，染色质聚集、固缩、裂解；胞质内颗粒增加，有空泡形成；线粒体的数目及形状发生改变；膜流动性降低；溶酶体内容物增多，导致溶酶体酶β-半乳糖苷酶活性升高
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文献和实验β-半乳糖苷酶染色
细胞衰老是细胞在正常环境条件下发生的功能减退、逐渐趋向死亡的现象。衰老的细胞虽然生长发生不可逆性停滞，不能进入S期，但仍具有代谢功能，而且比年轻细胞的抗凋亡能力强，可以继续生存。其特征是细胞体积变大，呈扁平状；细胞核变大，核膜内陷，染色质聚集、固缩、裂解；胞质内颗粒增加，有空泡形成；线粒体的数目及形状发生改变；膜流动性降低；溶酶体内容物增多，导致溶酶体酶β-半乳糖苷酶活性升高。衰老细胞所具有的上述特征成为各种细胞衰老检测手段的依据。
(1)细胞接种前在6孔培养板中预先放置灭菌的细胞片a，每孔加入1x105个细胞，37℃ 5% CO2
条件下培养过夜，使细胞在细胞片上生长。
(2)在超净工作台中吸弃6孔培养板中的培养液a，加入x1PBS，洗涤细胞1次，随后加入2%甲
醛/0.2%戊er醛固定液a，室温条件下固定3~5分钟。
(3)吸弃2%甲醛/0.2%戊er醛固定液，加入x1PBS，洗涤细胞3次，每次3分钟。
(4)吸弃x1PBS，加X-Gal溶液以浸没细胞片为宜，37℃孵育4~8小时或过夜，用保鲜膜包被6
孔培养板以防染液蒸发。
(5)取出细胞爬片，去离子水。冲洗2次，再次用固定液固定4分钟，流水轻轻冲洗。
(6)将细胞爬片按此顺序脱水、透明:95%酒精I(2分钟)→95%酒精Ⅱ°(2分钟)→100%酒精
| (2分钟)→100%酒精I(5分钟)→二甲苯|(2分钟)→二甲苯Ⅱª(2分钟)。
(7)中性树胶封片。
(8)在普通光学显微镜下观察衰老细胞形态。
每张片子镜下计数400个细胞，确定X-Gal染色阳性细胞(衰老细胞)在细胞群体中的所占的百分
比即衰老细胞率(蓝染细胞数/总计细胞数x100%).
HE&尼式染色.pdf
β-半乳糖苷酶试验是检验主管技师考试辅导的部分内容，以下是医学教育网对这块内容的整理，希望对考生有所帮助： β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验） （1）试剂：0.75M ONPG溶液。 （2）方法：从克氏双糖铁培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入一滴甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37℃水浴5min，加入0.25ml ONPG试剂，水浴20min～3h观察结果。 （3）结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20～30min内显色
一种能把乳糖水解成葡萄糖和半乳糖的酶。 EC3． 2． 1． 23。一般是指能将β -半乳糖苷水解为半乳糖和糖苷的酶。很早以来，就被认为是大肠杆菌诱导酶的典型。分子量 54万，为四聚体。其结构基因为 LacZ，与 LacY（半乳糖苷透性酶）和 LacA（半乳糖苷转乙酰酶）同组成乳糖操纵子，并在特异的乳糖操纵系统中的阻遏物、操纵基因、启动子等的协同下，支配调节β -半乳糖苷酶的合成。当培养基中无诱导物质时，每一细胞中虽然没有几个分子的β -半乳糖苷酶；但一旦被诱导，则每一
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