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- 2026年01月09日
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免疫共沉淀：蛋白间相互作用是细胞各种基本功能的主要完成者，参与几乎所有的重要生命活动。因此，蛋白-蛋白相互作用研究以及建立相互作用的关系网络图，具有十分重要的意义，也是目前蛋白质研究领域的热点。
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文献和实验免疫共沉淀实验原理：
以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法，是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。
当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。
免疫共沉淀实验优势：
a) 取材可以选择该目的蛋白所在物种、特定组织、细胞，因此CoIP能够反应该蛋白在天然组织细胞状态下存在的互作关系蛋白；
b) 找出整个复合体中直接/间接互作的多个蛋白，研究复合体组成；
c) 通过与质谱鉴定连用可以初筛到一系列未知蛋白，再通过其他技术进一步验证。
免疫共沉淀实验注意事项
a)需要特异性IP级别诱饵蛋白抗体（重点）；
b)如果没有特异性抗体，则需要考虑构建重组标签质粒，用标签抗体进行CoIP实验；
c)样品种类实验风险：过表达细胞样品<细胞样品<动物组织样品<植物样品（通常为转基因植物，标签抗体也很难达到特异性富集）；
d)CoIP-MS风险：由于存在特异性抗体高丰度蛋白，质谱不一定能够鉴定到诱饵蛋白。
原理 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是利用抗原和抗体的特异性结合以及 Protein A 或 G 特异性地结合到抗体的Fc 片段的现象探测两个蛋白分子间是否存在相互作用的一种方法。在细胞裂解液中加入针对蛋白M的抗体，孵育后再加入Protein A 或 G 预处理的 Sepharose 珠，若细胞中有与蛋白M结合的蛋白 N，就可以形成这样一种复合物：“蛋白 N-蛋白M—抗蛋白 M 抗体—Protein A 或 G—Sepharose 珠”，经 SDS
您对蛋白-蛋白互作检测的金标准——免疫共沉淀了解多少？Dr. 赛带您从原理出发揭开免疫共沉淀实验的神秘面纱，手把手教您设置对照，选择固相介质，逐一了解影响免疫共沉淀实验的关键因素。
mijiagaga 有郁闷问题想请教各位大侠： 我做免疫共沉淀，从细胞中提取内源性表达的蛋白，按照常规方法做，可是最后银染总是没有条带？ 多谢多谢！ woxingwosu 有几个问题需要确认一下： 1. 你做免疫共沉淀（IP）的抗体是否可以用。WEstern能识别的抗体不一定能用在IP。 2. 内源性蛋白的表达量。需要先确认一下这个蛋白的表达量，如果这个蛋白本来表达量就很低
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