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- 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。
- 上海
- 2025年12月29日
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- 详细信息
- 技术资料
- 提供商：
上海研匠生物
- 服务名称：
CO-IP实验
- 规格：
一个蛋白一个抗体
免疫共沉淀 CO-IP实验
一、实验流程1. 用预冷的PBS洗涤细胞两次，最后一次吸干PBS。
2. 按比例加入适量预冷的RIPA 缓冲液。
3. 用预冷的细胞刮子将细胞从培养皿或培养瓶上刮下，把悬液转到1.5EP管中，4°C，缓慢晃动（EP管插冰上，置水平摇床上）。
4. 4°C离心后，立即将上清转移到一个新的离心管中。
5. 准备Protein A agarose，用PBS 洗两遍珠子，然后用PBS配制成50%浓度，建议减掉枪尖部分，避免在涉及琼脂糖珠的操作中破坏琼脂糖珠。
6. 按比例加入Protein A琼脂糖珠（50%），4℃摇晃10min（EP管插冰上，置水平摇床上），以去除非特异性杂蛋白，降低背景。
7. 4°C离心后，将上清转移到一个新的离心管中，去除Protein A珠子。
8. 用BCA法测定蛋白浓度，测前将总蛋白至少稀释1：10倍以上，以减少细胞裂解液中去垢剂的影响（定量，分装后，可以在-20℃保存一个月）。
9. 用PBS将总蛋白稀释到合适浓度。
10. 加入一定体积的预先稀释的一抗。
11. 4°C缓慢摇动抗原抗体混合物过夜或室温2h，激酶或磷酸酯酶活性分析建议用2 h室温孵育。
12. 加入Protein A琼脂糖珠来捕捉抗原抗体复合物，4°C缓慢摇动抗原抗体混合物过夜或室温1h。
13. 瞬时离心5s，收集琼脂糖珠-抗原抗体复合物，去上清，用预冷的洗液（或PBS）洗3遍。
14. 将上样样品煮5min，以游离抗原，抗体，珠子，离心，将上清电泳，收集剩余琼脂糖珠，上清也可以暂时冻-20℃，留待以后电泳，电泳前应再次煮5min变性。
二、服务说明及结果
1. 客户提供：新鲜的样本材料（组织、细胞或蛋白溶液）；用于免疫沉淀的一抗（或由我司代购）及待测蛋白的相关信息。
2. 公司提供：Western blot检测图，完整的实验报告，以及相应的结果及分析。
3. 实验周期：10-15个工作日。
附1：实验流程
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