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文献和实验DAPI单染原理
DAPI是含有特定AT序列DNA的一种嵌入剂，它能像Hoechst染料一样粘附在DNA双螺旋的小沟区。尽管DAPI不能通过活细胞膜，但却能穿透扰乱的细胞膜而对细胞核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体DNA，叶绿体DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色体DNA。DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360 nm和460 nm。
DAPI单染步骤
1. 用1mL 的 ddH2O 将 DAPI进行溶解，制成为： 2.9mM 的 DAPI溶液（1mg DAPI：1mL H2O）。
备注：DAPI 不能直接采用 PBS 等缓冲溶液进行溶解，需要先用水将其溶解。
2. 取适量 DAPI水溶液 加到 PBS缓冲液中，制成：10~50µM 的 DAPI溶液， 推荐采用：PBS配制方法： 使用 8.00g,NaCl; 0.20g KCl; 2.9g Na2HPO4·12H2O 以及0.2g KH2PO4溶解于1L纯水中。
3. 将1/10体积培养基的 DAPI溶液 加入细胞培养基中，也可以采用 1/10浓度 的 DAPI缓冲液 替代培养基使用。
4. 在37℃恒温条件下培养细胞约 10~20 分钟之间。
5. 用 PBS 或者 合适的缓冲液洗两次细胞。
6. 用带有 360nm激发波长 和 460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜进行观察细胞。
DAPI 染色 1．原理DAPI为4’，6二脒基-2-苯吲哚(4’，6―diamidino-2―phenylindole)能与双链DNA小槽，特别是AT碱基结合，也可插入少于3个连续AT碱基对的DNA序列中。当它与双链DNA结合时，荧光强度增强20倍，而与单链DNA结合则无荧光增强现象，因此是一种简易、快速和敏感地检测DNA的方法。DAPI的荧光强度虽较Hoechst低，但荧光稳定性优于Hoechst；其特异性较溴化乙啶(ethidlium bromide，EB)和碘
DAPI Staining To visualize DNA, incubate fixed samples with 100 ng/ml 4',6'-diamidino-2-phenylindole hydrochloride (DAPI) in PBS for 30 min. Rinse 3x with PBTw. Materials PBS: Sambrook et al. (Molecular Cloning ). PBTw
DAPI Counterstaining Protocols
实验试剂 Choose one of the following forms of DAPI: DAPI dihydrochloride (MW = 350.3) DAPI dihydrochloride, FluoroPure™ grade (=98% pure) DAPI dilactate (MW = 457.5) For fluorescence microscopy
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
