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- 2026年01月08日
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- 提供商：
上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称：
细胞原位杂交实验
一、样本处理
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脱蜡与复水
- 石蜡切片依次用二甲苯脱蜡（2×15min），无水乙醇梯度（100%-30%）复水，最后用DEPC水清洗。
- 冰冻切片需用PBS洗涤后，进行梯度乙醇脱水（70%-100%）。
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抗原修复与去膜
- 使用蛋白酶K（1μg/ml）37℃孵育30-40min，增强组织渗透性。
- 甘氨酸溶液（2mg/ml）终止蛋白酶活性。
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变性处理
- 78℃预冷的变性液（如含盐酸或乙酸酐的溶液）处理，破坏DNA/RNA双链结构。
二、探针制备与检测
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探针标记
- 使用地gao辛（DIG）、生物素或荧光素标记探针，通过随机引物法或PCR法合成。
- 探针浓度通常为0.5-5μg/ml，需通过梯度稀释检测敏感性。
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探针变性
- 双链探针75℃水浴5min后冰浴，单链探针需预退火。
三、杂交反应
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预杂交
- 预杂交液含甲酰胺（50%）、硫酸葡聚糖（50%）、BSA及载体核酸，42℃孵育30min-2h。
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杂交
- 将探针稀释至400-1000ng/ml，滴加至样本，42℃杂交16-20h（DNA探针）或过夜（RNA探针）。
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杂交后清洗
- 依次用SSC缓冲液（4×→0.2×）梯度清洗，温度从37℃升至57℃，去除非特异性结合。
四、抗体反应与显色
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封闭与抗体孵育
- 3%BSA封闭非特异性位点，滴加抗-DIG-HRP抗体（1:5000稀释），4℃过夜。
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显色与复染
- DAB显色液（含HRP底物）避光反应10-30min，苏mu精复染细胞核。
- 荧光标记探针直接使用PI/DAPI染色，无需抗体步骤。
五、封片与观察
- 乙醇梯度脱水后，中性树胶封片，镜检观察信号定位。
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文献和实验实验目的 掌握细胞计数的方法。 了解区分细胞存活状态的方法。 实验用品 0.4%台盼蓝溶液、无水乙醇或95%乙醇溶液、脱脂棉 普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。 实验原理 在细胞培养工作中，常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活，确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度，如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别，冻存细胞复苏后的活力检测等。细胞悬液制备后，常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色，进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞
流式细胞技术（Flow cytometry, FCM）是利用流式细胞仪进行的一种单细胞定量分析和分选技术。流式细胞术是单克隆抗体及免疫细胞化学技术、激光和电子计算机科学等高度发展及综合利用的高技术产物，它能有效地从单细胞水平区分异质性细胞群体，检测对象包括但不限于悬浮细胞、贴壁细胞或从实体组织分离的单细胞悬液和其他生物颗粒。 一、细胞表面染色步骤 样本准备 1.1 采集全血或组织（脾，淋巴结，胸腺和骨髓），用细胞染色buffer(或含1%BSA的PBS)制成单细胞悬液。对于体外
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