DTA负筛选基因

DTA（Diphtheria Toxin A）负筛选基因是一种常用的遗传工程工具，主要用于剔除未发生特定重组事件的细胞。这种技术依赖于白喉毒素A链（DTA），它能抑制蛋白质合成并导致细胞死亡。在基因打靶实验中，DTA通常被用来作为负筛选标记，以确保只有那些经历了正确同源重组的细胞才能存活下来。

DTA负筛选的工作原理

• 作用机制：DTA编码的是白喉毒素的一个亚单位，该毒素能够阻断真核生物中的蛋白质合成过程。当DTA表达时，它可以杀死含有它的细胞，除非这些细胞具备抵抗此毒性的能力。
• 应用背景：在构建转基因动物或细胞系的过程中，研究人员常常需要筛选出发生了精确DNA整合的细胞。为了做到这一点，除了使用正筛选标记如neo等来选择成功导入外源DNA的细胞之外，还会利用到DTA这样的负筛选标记来淘汰那些没有正确整合目标DNA的细胞。

DTA负筛选的应用

• 在CRISPR-Cas9介导的全基因组敲除文库筛选中，DTA可以与TK（胸苷酸激酶）一起用作报告系统的一部分，帮助识别参与天然免疫信号通路调控的关键宿主基因。
• 通过将DTA置于特定启动子控制之下，比如IFNβ启动子区域的最佳截短版本，可以在病毒感染后诱导EGFP或者自杀基因TK和DTA的表达，从而实现对相关基因的功能性筛选。

使用DTA负筛选的优势

• 提高特异性：由于DTA能够有效清除不希望出现的随机整合事件，因此它有助于增加最终获得的目标克隆群体中的正确重组体比例。
• 增强效率：结合其他筛选方法（例如G418抗性筛选），DTA负筛选可以帮助快速缩小候选细胞株范围，减少后续分析所需的工作量。