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- 2025年07月06日
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文献和实验Invitrogen 性能卓越的系统整合了可以利用的最好的RT技术，包括SuperScript™ III RT和最新推出的Thermo-X™ RT。SuperScript™ III RT是M-MLV RT基因工程升级版本，减少了RNaseH活性，提供更高的热稳定性（1-3）。这种酶可以在高达55℃的情况下合成cDNA，比以前使用的反转录酶提供更高的特异性，更高的cDNA产量以及更多的全长产物。Thermo-X™ RT克隆自一种嗜热真细菌，提供高达70℃的热稳定
，然后取出1/10的反应产物进行PCR。在一步法RT-PCR中，逆转录和PCR在同时为逆转录和PCR优化的条件下，在一只管中顺次进行。 图1. RT-PCR概图 这本指南阐述了成功RT-PCR和PCR的关键。高灵敏性（从小量样品中得到足量结果）和高特异性（选择性地仅得到所需的产物）是成功PCR的标志。可以通过仔细的实验设计（如选择恰当的酶，设计最理想的引物，使用不同的缓冲液和添加剂，确定循环参数及制备高质量的模板等）以获得最佳的RT-PCR和PCR。增加RT-PCR灵敏度
3 ）。一步法RT-PCR在处理大量样品时易于操作，有助于减少残余污染，因为在cDNA合成和扩增之间不需要打开管盖。一步法可以得到更高的灵敏度，最低可以达到0.1pg总RNA，这是因为整个cDNA样品都被扩增（图9 ）。对于成功的一步法RT-PCR，一般使用反义的基因特异性引物起始cDNA合成。 表3. 一步法和两步法RT-PCR的比较
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