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- 2025年07月16日
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文献和实验3和4）。使用oligo(dT)引物和SuperScriptⅡ逆转录酶合成cDNA。扩增对象为DNA聚合酶εmRNA 5'端377bp片段和复制酶A mRNA的643bp片段，两者都为中等丰度。将1/10的cDNA合成反应产物使用Taq DNA聚合酶扩增30个循环。 为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏）中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA，对于长期贮存更是如此。从大鼠肝脏中提取的RNA，在水中贮存一个星期就基本降解了，而从大鼠脾脏中提取的RNA，在水中保存3年仍保持稳定
分钟以延伸引物。 反转录酶的热稳定性各不相同，而热稳定性决定了每种酶的最佳聚合温度。使用热稳定的反转录酶，可达到更高的反应温度（如 50 ℃），有助于高GC或具有复杂二级结构 RNA 的变性，同时不影响酶活性（图 7）。 聚合时间取决于反转录酶的持续合成能力，即单次合成过程中掺入的核苷酸数量。例如，持续合成能力较低的野生型 MMLV 反转录酶通常需要 60 多分钟才能完成 cDNA 合成。相比之下，持续合成能力较高的改良型反转录酶可能只需要 10 分钟时间，就可以合成 9 kb cDNA
1和2）或500ng和50ng Hela细胞poly(A)+ RNA（分别为泳道3和4）。使用oligo(dT)引物和SuperScriptⅡ逆转录酶合成cDNA。扩增对象为DNA聚合酶εmRNA 5'端377bp片段和复制酶A mRNA的643bp片段，两者都为中等丰度。将1/10的cDNA合成反应产物使用Taq DNA聚合酶扩增30个循环。 为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏）中
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