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北京诺禾致源科技股份有限公司
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定量蛋白质组
定量蛋白质组技术比较
iTRAQ和TMT是分别由美国AB Sciex公司和Thermo公司研发的多肽体外标记定量技术, 采用8种或18种同位素标签,通过特异性标记多肽的氨基酸基团, 一次上机可实现8种或18种不同样本中蛋白质的相对定量,是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术。| 技术类型 | 是否标记 | 数据扫描模式 | 技术特点 |
|---|---|---|---|
| TMT | 是,多样本上机 | DDA | 定量准确,重复性好,不可比较有无蛋白,适用于同一物种同一组织共有蛋白差异比较,定量值存在压缩效应 |
| iTRAQ | |||
| Label-free | 否,多样本上机 | DDA | 适用范围广泛,成本较低,可用于“有无蛋白”比较,定量准确性和重复性不高 |
| 4D Label-free | 否,多样本上机 | DDA | 扫描速度快、灵敏度高,检测深度高,需求样本量少,可获取CCS |
| DIA | 否,多样本上机 | DDA(建库) | 蛋白覆盖度高,定量准确,重现性高,适用于大样本,样本少时成本较高 |
| 否,单样本上机 | DIA | ||
| 4D DIA | 否,多样本上机 | DDA(建库) | 1. 近乎100%的离子利用率,提升检测灵敏度; 2. 更高的检测深度和覆盖度; 3. 定量重复性、完整性、可靠性全面提升。 |
| 否,单样本上机 | DIA | ||
| Deep DIA(Astral) | 否,单样本上机 | DIA | 深覆盖、高准确、超快速,蛋白鉴定深度较传统定量技术提高了30%以上;机时更短,速度更快,周期更短;无损轨道分辨率更高。 |
| 高深度血液蛋白质组 | 否,单样本上机 | DIA | 针对不同物种的血液样本,可以达到更多样本检出 |
定量蛋白质组技术参数
| 产品 | 质谱平台 | 项目经验 | 周期 |
|---|---|---|---|
| TMT/iTRAQ | Thermo Q ExactiveTM HF-X/Orbitrap Exploris 480 | 蛋白鉴定数目6000以上 | 30个自然日 |
| Label-free | Thermo Q ExactiveTM HF-X/Orbitrap Exploris 480 | 蛋白鉴定数目3000以上 | 30个自然日 |
| 4D Label-free | Bruker tims TOF Pro 2 | 蛋白鉴定数目6000以上 | 30个自然日 |
| DIA | Thermo Q ExactiveTM HF-X/Orbitrap Exploris 480 | 蛋白鉴定数目6000以上 | 30个自然日 |
| 4D DIA | Bruker tims TOF Pro 2 | 蛋白鉴定数目6000以上 | 30个自然日 |
| Deep DIA(Astral) | Orbitrap Astral | 蛋白鉴定数目10000以上 | 15个自然日 |
差异蛋白火山图
横坐标表示差异蛋白的差异倍数(log2值),纵坐标表示P-value(-log10值), 黑色代表差异不显著的蛋白,红色代表上调蛋白,绿色代表下调蛋白。
差异蛋白聚类热图
纵向是样品的聚类,横向是蛋白的聚类,聚类枝越短代表相似性越高。从纵向聚类可 以看出样品间蛋白含量的表达模式聚类。
GO富集柱状图
横坐标表示GO三个大类(细胞组分、分子功能、生物过程)的富集结果,纵坐标 为与该GO相关的差异蛋白数目占GO注释的所有差异蛋白数目的百分比。
差异蛋白KEGG富集气泡图
横坐标为相应通路中差异蛋白的数目与鉴定出的总蛋白数目的比值,值越大,说明 在该通路中差异蛋白富集程度较高。点的颜色代表超几何检验的P-value值,值越 小,说明检验的可靠性越大、越具统计学意义。点的大小代表相应通路中差异蛋白 的数目,越大,该通路中差异蛋白就越多。
KEGG富集通路图
上图绿色框标记的为鉴定出的总蛋白,蓝色框标记的是下调差异蛋白,红色 框标记的是上调差异蛋白,黄色框标记的是通路中该功能对应的多个蛋白既 有上调差异蛋白,也有下调差异蛋白。
蛋白互作网络图
互作网络中每个节点表示一个蛋白,节点大小表示与之互作蛋白的个数,节点越大 说明与之互作的蛋白越多。节点的颜色表示此节点的聚集系数,颜色越红代表聚集 系数越高,即在该网络中处于更中心的位置。节点之间的连线表示蛋白互作的强 弱,连线越粗代表蛋白互作越强。
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