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- 2026年04月25日
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北京诺禾致源科技股份有限公司
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定量蛋白质组
iTRAQ/ TMT定量蛋白质组
技术原理
iTRAQ和TMT原理类似,以TMT试剂为例,该试剂结构由报告基团、中性平衡基团和反应基团三部分组成。不同报告基团及其相对应平衡基团的质量和都相同,而反应基团能与赖氨酸ε氨基和所有肽链的氨基末端连接,可标记所有氨基酸。
不同标记试剂与来源于不同样品胰酶消化后的肽段结合,经过色谱分离,并通过一级质谱和二级质谱。
平衡基团在二级质谱时发生中性丢失,而报告基团在二级质谱低质量区域产生多个报告离子,其信号强度分别代表该标记样品的表达量, 根据报告离子的峰面积计算同一蛋白质同一肽段在不同样品间的比值,从而实现蛋白的相对定量。
技术特征
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1. 通量高,不受样本数目的限制
单次上机最多可以同时进行8个样品(iTRAQ)或18个样品(TMT)蛋白的鉴定和定量, 超过8个样品(iTRAQ)或18个样品(TMT)可以通过设置内参,形成搭桥,实现多次上机数据之间的比较,不受样本数目的限制。 -
2. 定量准确,重复性高
不同样本标记之后混样,统一处理、上机,与非标记定量样本单独处理、上机相比, 减少了样本处理和上机造成的实验误差,提高了定量的准确性和重复性。 -
3. 蛋白检测范围广
无物种特异性限制,理论上可用于所有物种。蛋白范围广,胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白、分泌蛋白等皆可检测。 蛋白丰度和分子质量跨度大,可检测出低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。
技术路线
信息分析流程
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文献和实验本节课程介绍了label-free定量蛋白质组学技术的原理及应用。主要包括：（1）以MS数据为例，系统介绍label-free技术进行蛋白质定量的技术流程和原理。（2）介绍免费的label-free分析套件—Maxquant和Perseus。（3）以免疫沉淀（IP）数据为例，展示label-free进行蛋白质互作定量的应用。（4）以数据为例，展示label-free在外泌体蛋白定量分析中的应用。
定量蛋白质组学分析 定量蛋白质组学分析（Quantitative Proteomics）是对一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂混合体系内所有蛋白质进行精确鉴定和定量。可用于筛选和寻找任何因素引起的样本之间的差异表达蛋白，结合生物信息学揭示细胞生理病理等功能，同时也可对某些关键蛋白进行定性和定量分析。目前定量蛋白质组学技术常见标记（Label）和非标记的（Label Free）定量策略。 定量蛋白质组学技术常见的几类主要包括：Label Free定量蛋白组分析、SILAC与免疫
定量蛋白质组学 在分析正常组织或病理组织变化过程中(如在生长、分化、药物暴露或肿瘤发作期间)蛋白质的表达谱时，能够定量分析变化是非常重要的，明确地探测这些多肽经历的上调或下调过程也是很重要的。这些蛋白质有可能是药物作用的关键靶标，因此检测这些蛋白质对药物研发和医学处理至为重要。最早达到这个目标的方法是正确应用一些计算机程序(如Melanie或PDQuest)来分析比较这些组织(如正常组织和病理组织)的标准图。为了能够获得符合统计学要求的标准图，最少需要
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
