BCA蛋白含量检测试剂盒

产品介绍

  BCA蛋白浓度检测是一个实验，是根据吸光值可以推算出蛋白浓度.碱性条件下，蛋白将Cu²⁺还原为Cu⁺，Cu⁺与BCA试剂形成紫颜色的络合物，两分子BCA螯合一个Cu⁺。将该水溶性复合物在562nm处的吸收值，与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。

  BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。

  本试剂盒标准品2-8℃保存，无需分装冻存，使用方便。检测浓度下限达到25µg/mL，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µL，标准曲线设定范围25-1000µg/mL。BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇(DTT)低于1mM，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。

 

使用方法

1．标准孔溶液配制：取一块酶标板，按照下表加入试剂

孔号	1	2	3	4	5	6	7	8
蛋白标准溶液（μL）	0	0.5	1	2	4	8	14	20
去离子水（μL）	20	19.5	19	18	16	12	6	0
对应蛋白含量（μg）	0	0.5	1.0	2.0	4.0	8.0	14.0	20.0

2．样本溶液稀释：估计待测样本浓度，做数个稀释，以保证待测孔蛋白含量落入标准曲线检测范围内。将待测样本原液（可选）和稀释后的样本加入空白孔中；

3．工作液配制：根据标准孔的数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀后，每孔加入200μL BCA工作液；

4．孵育、记录数据：轻晃酶标板20s，37℃或60℃放置30分钟后，测定562nm的吸光度值并记录；

5．绘制标准曲线：以蛋白含量(μg)为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线，检查R2值是否达到要求；

6．计算样本蛋白含量：根据待测样本吸光度值计算样本孔蛋白含量(μg)，除以样品稀释液总体积(20μL)，乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位：μg/μL)。

 

注意事项

1．建议每次测定时都做标准曲线。因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线；

2．如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液的用量使不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少；

3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；

4．本产品仅限于专业人员的科学研究用。